細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 中文名稱：Caspase 3 活性檢測試劑盒 英文名稱：Caspase 3 Activity Assay Kit 產(chǎn)品規(guī)格：20次|100次 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6339 本試劑盒是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中caspase 3酶活性或純化的caspase 3酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測時，除標準曲線外可以檢測20個樣品。 Caspase是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3也稱CPP32、Yama或apopain，有時被寫作caspase-3或caspase 3，屬于caspase家族的CED-3亞家族(CED-3 subfamily)，是細胞凋亡過程中的一個關(guān)鍵酶。Caspase 3是哺乳動物細胞中研究多的一個caspase。Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9，并可以直接特異性剪切許多caspase底物，包括PARP(poly(ADP-ribose)polymerase)，ICAD(Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease)，gelsolin和fodrin等。這些由caspase 3介導(dǎo)的蛋白剪切是細胞凋亡分子機制的重要組成部分。另外，caspase 3在細胞核凋亡過程中也起到了關(guān)鍵作用，包括染色質(zhì)固縮(chromatin condensention)，DNA片段化(DNA fragmentation)等。同時caspase 3對細胞起泡(cell blebbing)也起到關(guān)鍵作用。 本Caspase 3 活性檢測試劑盒是基于caspase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 3的活性。pNA在405nm附近有強吸收。 試劑盒中提供了caspase 3催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA，可以作為定量caspase 3酶活性的標準品。 試劑盒組分： 裂解液——————8ml 檢測緩沖液——————8ml Ac-DEVD-pNA(2mM)———200μl pNA(10mM)——————200μl 儲存條件：-20℃。 |
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) Cortex ailanthi椿皮PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Folium mori桑葉PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Norwalk Virus(NV)諾沃克病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Rhizoma cynanchi stauntonii白前PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Staphylococcus nepalensis尼泊爾葡萄球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒B型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Murray Valley Encephalitis Virus(MVEV)墨累谷腦炎病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Clostridium septicum敗血梭狀芽胞桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Fructus viticis蔓荊子LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Shewanella putrefaciens希瓦LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Sheeppox Virus(SPPV)綿羊痘病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Caspase 3 活性檢測試劑盒包姜氏瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱：Bordet-Gengou Agar Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 組織TAK1-TAB1激活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 20次 脫纖維羊血 英文名稱：Off fiber sheep blood 產(chǎn)品規(guī)格：50ml 體液D－乳酸比色法定量檢測試劑盒 20次 蟲卵細胞活力和死亡熒光定量檢測試劑盒 50次 石蠟切片免疫組織化學(xué)HRP聯(lián)DAB基礎(chǔ)檢測試劑盒（無一抗和二抗） 50次 細胞堿性活性比色法定量檢測試劑盒 20次 總膽汁酸（TBA）定量檢測試劑盒 20次 VZV（VARICELLA ZOSTER）病毒標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒 2次 MAPK蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒 25次 厭氧培養(yǎng)液 英文名稱：BL Agar Medium Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g
|
設(shè)為主頁
加入收藏
聯(lián)系我們
點擊放大
