培養(yǎng)：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。
4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計數(shù)。
7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) =計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線。

KF鏈球菌瓊脂 100 用于鏈球菌的選擇性分離及計數(shù)（GB、SN標準）

CIN-1培養(yǎng)基基礎 250g 用于分離小腸結腸炎耶爾森氏菌

改良Y培養(yǎng)基 250g 用于分離小腸結腸炎耶爾森氏菌

改良磷酸鹽緩沖液PSB 250g 用于小腸結腸炎耶爾森氏菌增菌培養(yǎng)

營養(yǎng)肉湯（NB） 250g 一般細菌培養(yǎng),轉種,復壯,增菌等（GB標準）

營養(yǎng)瓊脂（NA） 250g 細菌計數(shù)、不含糖，可作血瓊脂基礎和傳代用(GB標準)

改良番茄汁培養(yǎng)基 250g 用于食品中乳酸菌總數(shù)測定

MC培養(yǎng)基 250g 用于食品中乳酸菌總數(shù)測定

緩沖蛋白胨水（BPW） 250g 用于阪崎桿菌前增菌培養(yǎng)（GB標準）

鹽胱氨酸增菌液（SC） 250g 用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)（GB、SN標準）

膽硫乳瓊脂（DHL） 250g 腸道菌選擇性培養(yǎng)基，特別是沙門氏菌的選擇性分離（GB、SN標準）

三糖鐵（TSI）瓊脂 250g 生化培養(yǎng)基，用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選（GB標準）

SS瓊脂 250g 用于沙門氏菌，志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB標準）

亞硫酸鉍瓊脂（BS） 250g 用于沙門氏菌的選擇性分離（GB、SN標準）

WI38/VA13(SV-40Z轉化肺成纖維細胞)價格Calpastatin  鈣蛋白酶抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-FRA1(Ser265)  磷酸化FRA-1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser167)  磷酸化雌激素受體ER alpha 抗體 規(guī)格: 0.1mlCD167b/DDR2  盤狀結構域受體蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Trypsin Inhibitor/CRISP8  胰蛋白酶抑制劑抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-SEK1/MKK4 (Thr261)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體 規(guī)格: 0.1ml

Goat Anti-rabbit IgG/HRP  辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1mlphospho-CTNNBIP1 (Thr43/Ser50)  磷酸化β鏈接素相互作用蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

RASSF2  Ras相關結構域蛋白質2抗體 規(guī)格: 0.2mlPLAG1  多型性瘤基因1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

C1orf187  1號染色體開放閱讀框187抗體 規(guī)格: 0.2mlCD45/B220  白細胞共同抗原抗體 規(guī)格: 0.1ml

KIZUNA/C20orf19  20號染色體開放閱讀框19抗體 規(guī)格: 0.2mlCD36/PAS-4  CD36抗體 規(guī)格: 0.1ml

PSAP/PAP  前列酸性磷酸酶抗體 規(guī)格: 0.1mlEAAT3  膠質細胞谷氨酸運載蛋白3抗體(神經(jīng)/上皮細胞谷氨酸運載蛋白) 規(guī)格: 0.1ml

UEVLD/UEV3  泛素結合酶E2樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSLC27A2/ACSVL1  鏈脂肪酸輔酶A連接酶抗體 規(guī)格: 0.2ml

FANCD2  FANCD2抗體 規(guī)格: 0.1mlNucleoprotein TPR  核蛋白易位啟動子區(qū)域TPR抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD22/BLCAM  B淋巴細胞粘附分子CD22抗體 規(guī)格: 0.1mlC13orf38/LOC728591  13號染色體開放閱讀框38抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-p63 (Ser455)  磷酸化P63瘤抑制基因抗體 規(guī)格: 0.1mlPKC alpha  蛋白激酶C α抗體 規(guī)格: 0.2ml

GLP-1R  胰高糖素樣肽-1受體抗體 規(guī)格: 0.1mlFLIP/c FLIP  凋亡調節(jié)基因之一抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-DAG1 (Tyr892)  磷酸化肌萎相關蛋白DAG1抗體 規(guī)格: 0.1ml

實驗事項：
1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。