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類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶測(cè)試盒50管/48樣
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類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶測(cè)試盒50管/48樣公司正在出售的產(chǎn)品:1.56-100 ng/mL 人熱穩(wěn)定性腸毒素受體(hSTAR)ELISA試劑盒 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human TNF receptor-associated factor 6 0.78-50 ng/mL 蟹特定基因序列(Cytb)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 1.56-100 ng/mL EL
  類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶測(cè)試盒50管/48樣的詳細(xì)資料:

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱

類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶測(cè)試盒50管/48樣

規(guī)格

50管/48樣

檢測(cè)方法

紫外分光光度法

貨號(hào)

BJ-01S9660

11.png 

 

 

商品介紹:

測(cè)定意義:

花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素,屬黃酮類化合物?;ㄉ諒V泛存在于植物的根、莖、葉、花和果實(shí)中,使其呈現(xiàn)由紅到紫等不同顏色,是植物主要的呈色物質(zhì)。

類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶(UDP-glycose flavonoid glycosyltransferase, UFGT)是花色苷合成過程的最后一個(gè)酶,可以把不穩(wěn)定的花色素催化成花色苷,在一定范圍內(nèi),UFGT活性與花色素苷的合成呈現(xiàn)正相關(guān)。

測(cè)定原理:

UFGT催化UDPG與槲皮素生成UDP;UDP在丙酮酸激酶與乳酸脫氫酶作用下,氧化NADH為NAD+,NAD+生成速度與UDP含量成正比,通過340nm吸光度下降速度反映UFGT活性。

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔酶標(biāo)板、研缽、冰和蒸餾水。

測(cè)定步驟:

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。

5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。

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