操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

中文名稱(chēng)：CDK8andWnt抑制劑(Wogonin)

英文名稱(chēng)：Wogonin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X7859

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

花椒毒素

英文名：   8-Methoxypsoralen

英文別名：   xanthotoxin；methoxsalen；ammoidin

CAS登錄號(hào)：   298-81-7

分子式：   C12H8O4

常春藤皂苷元

英文名：   Hederagenin

英文別名：   3beta,4alpha)-3,23-Dihydroxyolean-12-en-28-oic acid

CAS登錄號(hào)：   465-99-6

分子式：   C30H48O4

鷹嘴豆芽素A

英文名：   Biochanin A

英文別名：   5,7-Dihydroxy-4'-methoxyisoflavone；Genistein 4′-methyl ether；5,7-Dihydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-4H-chromen-4-one

CAS登錄號(hào)：   491-80-5

分子式：   C16H12O5

圣草酚

英文名：   Eriodictyol

英文別名：   Eriodictiol;(S)-3’,4’,5,7-Tetrahydroxyflavanone; (S)-2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-2,3-dihydro-5,7-dihydroxy-4- benzopyrone

CAS登錄號(hào)：   552-58-9

分子式：   C15H12O6

補(bǔ)骨脂酚

英文名：   Bakuchiol

英文別名：   4-[(1E,3S)-3-ethenyl-3,7-dimethyl-1,6-octadienyl]-Phenol

CAS登錄號(hào)：   10309-37-2

分子式：   C18H24O

川陳皮素

英文名：   Nobiletin

英文別名：   2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5,6,7,8-tetramethoxychromen-4-one

CAS登錄號(hào)：   478-01-3

分子式：   C21H22O8

鉤吻素子

英文名：   Koumine

CAS登錄號(hào)：   1358-76-5

分子式：   C20H22N2O

分子量：   306.40

鉤吻堿

英文名：   Gelsemine

英文別名：   Gelsemine free base

CAS登錄號(hào)：   509-15-9

分子式：   C20H22N2O2

獐牙菜苷

英文名：   Sweroside

英文別名：   (4aS,5R,6S)-5-Ethenyl-6-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,4a,5,6-tetrahydro-3H-pyrano[3,4-c]pyran-1-one

CAS登錄號(hào)：   14215-86-2

分子式：   C16H22O9

小白菊內(nèi)酯

英文別名：   2,3,6,7,7a,8,10a,10b-Octahydro-1a,5-dimethyl-8-methyleneoxireno(9,10)cyclodeca(1,2-b)furan-9(1aH)-one;Parthenolide;4Xi-germacra-1(10),11(13)-dien-12-oic acid, 4,5-epoxy-6.alpha.-hydroxy-, gamma-lactone;Oxireno(9,10)cyclodeca(1,2-B)furan-9(1ah)-one, 2,3,6,7,7A,8,10A,10B-octahydro-1A,5-dimethyl-8-methylene-;Parthenlide

CAS登錄號(hào)：   20554-84-1

分子式：   C15H20O3

分子量：   248.32

根皮素

英文名：   Phloretin

英文別名：   3-(4-hydroxyphenyl)-1-(2,4,6-trihydroxyphenyl)propan-1-one

CAS登錄號(hào)：   60-82-2

分子式：   C15H14O5

CDK8andWnt抑制劑(Wogonin)迪夫快速染色液  2×100ml|2×500ml|3×100ml|3×250ml|3×500ml  Diff-Quik Stain Solution2 ug pMETα A pMETα A 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

Rakoff染色液  100ml|500ml  胰蛋白胨 Tryptone 250g

網(wǎng)織紅細(xì)胞染色液  50ml|100ml  1瓶 SHZ-88細(xì)胞株 SHZ-88 低溫運(yùn)輸和保存

煌焦油藍(lán)染色液  100ml  TMP瓊脂培養(yǎng)基 TMP Agar 250g

支原體染色液  10ml|50ml  Dienes Solution5g 腐胺 1,4-Diaminobutane         室溫干燥避光保存

Dacie氏液  100ml  50T 大米BT63基因PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

紅細(xì)胞稀釋液(計(jì)數(shù)液)  100ml  250次 綠如藍(lán)蛋白染液 One-Step PAGEblue 常溫保存

血小板稀釋液(計(jì)數(shù)液)  100ml  2 ug pBC-SK pBC-SK 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液(計(jì)數(shù)液)  100ml  50次 革氏陽(yáng)性細(xì)菌質(zhì)粒DNAout Gram+ Bacterial Plasmid DNAOUT 常溫保存(RNase A溶液4℃保存)

嗜酸性粒細(xì)胞染色液  2×100ml  2 ug pET-32a(+) pET-32a(+) 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

尿沉渣染色液(Sternheimer法)  50ml|100ml  2015版中國(guó)藥典培養(yǎng)基