中文名稱：MEK抑制劑（Cobimetinib racemate）

英文名稱：Cobimetinib racemate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8419

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

大鼠 PRL4A1 基因全長ORF克隆大鼠丙酮酸激M2型同工(M2-PK)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠 OAT 基因全長ORF克隆大鼠丙二酸單酰輔A脫羧(MLYCD)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠 CDKN2AIPNL 基因全長ORF克隆大鼠丙二酸單酰輔A(malonyl CoA)免疫試劑盒*直銷

大鼠 KCNA10 基因全長ORF克隆大鼠丙二醛(MDA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠 MYL12A 基因全長ORF克隆大鼠丙氨基轉(zhuǎn)移(ALT)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠 FGG 基因全長ORF克隆大鼠別孕烯醇酮/3α,5α-四氫孕酮(AP/3α,5α-THP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠 TRIP4 基因全長ORF克隆大鼠表皮生長因子受體(EGFR)免疫試劑盒*直銷

大鼠 KRT15 基因全長ORF克隆大鼠表皮生長因子(EGF)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠 ERAP1 基因全長ORF克隆大鼠胞外銅鋅超氧化物歧化(Cu/Zn-SOD/SOD3)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

大鼠 MCM7 基因全長ORF克隆大鼠胞漿型磷脂A2(cPLA2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠 METTL1 基因全長ORF克隆大鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)免疫試劑盒*直銷

MEK抑制劑（Cobimetinib racemate）100g RNPVP K30 (聚乙烯咯烷酮K30)   常溫

2 ug pEBFP-N1 pEBFP-N1 低溫運輸，-20℃保存

CDC厭氧菌瓊脂 CDC Anaerobic Agar 250g

25g 葡聚糖凝膠 LH-20 Sephadex LH-20  室溫保存

50T 小反芻獸疫病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

200 mL 大鼠胰島細(xì)胞分離液1.063 Cell Separation Solution -20℃保存

250mL Glycine Buffer（緩沖液）,0.2M,pH3.5   Glycine Buffer,0.2M,pH3.5   常溫保存

1.5mL 高GC DNA清除劑，PCR級 High GC DNA Erasol 常溫

250mL BSA Blocking Buffer in TBS with azide  BSA Blocking Buffer in TBS with azide  常溫保存

動力-硝酸鹽培養(yǎng)基（B法） Power - nitrate medium 250g

1瓶 MDCK(NBL-2)細(xì)胞株 MDCK(NBL-2) 低溫運輸和保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)