中文名稱：COX-1抑制劑(SC-560)

英文名稱：SC-560

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X8531

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

大鼠 EFNB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆細(xì)DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒  20次

大鼠 EFNA5 基因全長(zhǎng)ORF克隆細(xì)DNA損傷彗星*熒光檢測(cè)試劑盒  20次

大鼠 FIGF 基因全長(zhǎng)ORF克隆酵母DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒  20次

大鼠 VEGFC 基因全長(zhǎng)ORF克隆酵母DNA損傷彗星*熒光檢測(cè)試劑盒  20次

大鼠 FLT1 基因全長(zhǎng)ORF克隆果蠅DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒  20次

大鼠 EGFR 基因全長(zhǎng)ORF克隆細(xì)胞DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒  20次

大鼠 INSR 基因全長(zhǎng)ORF克隆熒光原位雜交彗星檢測(cè)試劑盒  20次

大鼠 TFRC 基因全長(zhǎng)ORF克隆檢測(cè)試劑盒  方法

大腸桿 (Shiga toxin) STX2 基因全長(zhǎng)ORF克隆10150  比色

大鼠 PGC 基因全長(zhǎng)ORF克隆100165001650023  熒光、比色

大鼠 MS4A2 基因全長(zhǎng)ORF克隆100161012410112  熒光、比色、化學(xué)發(fā)光

COX-1抑制劑(SC-560)PGT/Slco2a1  溶質(zhì)載體蛋白家族21成員2抗體 0.2mlPhospho-TH (Ser31)  磷酸化酪羥化抗體 規(guī)格: 0.1ml

DENND2C  MAP激激活死亡域蛋白2C抗體 規(guī)格: 0.2ml

KATNA1/Katanin p60 A1  劍蛋白p60亞基A1抗體 規(guī)格: 0.2ml

SFR19  剪接因子，/絲豐富19 規(guī)格: 0.2mlPhospho-SATB1 (Ser47)  磷酸化核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

MAL  MAL蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

VIP  管活性腸肽抗體 規(guī)格: 0.1ml

FLG  絲聚合蛋白/中間絲蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlhuman Fibrinogen  羊抗體 0.1ml

Rabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格: 0.1ml

phospho-CDKN2A/P16 (Ser8)  磷酸化抑基因p16抗體 規(guī)格: 0.1ml

ALAS1/ALAS-H  5-氨基乙酰丙酸合1抗體 規(guī)格: 0.2ml

GARB1/GABAR  γ1氨基丁酸受體β1抗體 規(guī)格: 0.1ml

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)