中文名稱：CDK2抑制劑(CVT-313)

英文名稱：CVT-313

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7861

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人 IL17Rb 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬ELISA試劑盒

人 CD47 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬組織因子(TF)免疫試劑盒進口、組裝

人 CD44 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬組織型纖溶原激活劑(t-PA)免疫試劑盒進口、分裝

人 NLGN1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬組胺(HIS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 GRN 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)免疫試劑盒*直銷

人 EpCAM / TROP1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)免疫試劑盒進口、組裝

人 Syk 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬轉(zhuǎn)錄因子AP-1 免疫試劑盒進口、分裝

人 GranzymeH 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 ICAM-2 / CD102 轉(zhuǎn)錄變體5 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ)免疫試劑盒*直銷

人 DCN / Decorin 轉(zhuǎn)錄變體A1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ)免疫試劑盒進口、組裝

人 S100A1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽豬主要急性期蛋白(MAP)免疫試劑盒進口、分裝

CDK2抑制劑(CVT-313)酸性固綠染色液  2×50ml  10L Tricine-SDS-PAGE陰極電泳液（干粉） Tricine SDS-PAGE Anode Buffer 常溫保存

精子核蛋白染色液(磷鎢酸法)  25T|50T  2 ug pYES3 pYES3 低溫運輸，-20℃保存

軟骨染色液(阿利新藍法,pH2.5)  2×50ml  50次 柱式水樣DNAout Column Water DNAOUT 常溫

軟骨染色液(阿利新藍法,pH1.0)  2×50ml  2 ug pET-23(+)-TEV pET-23(+)-TEV 低溫運輸，-20℃保存

Unna堿性美藍染色液  100ml  LEB肉湯 Listeria Enrichment Broth 250g

透明軟骨染色液(Unna堿性美藍法)  2×50ml  1瓶 3T3細胞株 3T3 低溫運輸和保存

精子核DNA染色液(AO法)  20T  1個 陶瓷研缽 （直徑75 mm）  常溫

軟骨染色液(番紅O法)  2×100ml  50 T 微量丙二醛測試盒/脂質(zhì)過氧化物測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

改良番紅O-固綠軟骨染色液  5×50ml|5×100ml  250mL MES Buffer,1.0M,pH5.0  MES Buffer,1.0M,pH5.0  常溫保存

Goldner三色染色液  6×50ml|6×100ml  100次 哺乳動物種屬鑒定PCR Mix(線粒體CO1基因） Animal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

亞甲基藍-酸性品紅染色液  2×50ml|2×100ml  2 ug pMAL- c2x pMAL- c2x 低溫運輸，-20℃保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)