細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 中文名稱:I型HDAC抑制劑(4SC-202 free base) 英文名稱:4SC-202 free base 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg 產(chǎn)品貨號:BJ-01X8163 4SC-202free base是一種I型HDAC抑制劑,能夠抑制HDAC1,HDAC2,和HDAC3的活性,IC50值分別為1.20μM,1.12μM和0.57μM;同時能夠抑制組蛋白賴特異性脫甲基酶1(Lysine specific demethylase1)的活性。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :910462-43-0 純度:98.99% 分子量:447.51 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 人 SULT1B1 基因全長ORF克隆人黃氧化(XOD)免疫試劑盒*直銷 人 ALOX5AP 基因全長ORF克隆人環(huán)腺苷(cAMP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 LTC4S 基因全長ORF克隆人環(huán)鳥苷(cGMP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 ADCK2 基因全長ORF克隆人環(huán)加氧2(COX-2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 NLK 基因全長ORF克隆人踝蛋白(talin)免疫試劑盒*直銷 人 RPA2 基因全長ORF克隆人花生四烯酸5脂氧合(ALOX5/LOG5)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 DKK4 基因全長ORF克隆人花生四烯酸15脂加氧(ALOX15/LOG15)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 CSNK1G1 基因全長ORF克隆人花生四烯酸12 - 脂氧合,12S型(ALOX12/LOG12)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 CST1 基因全長ORF克隆人花生四烯酸(AA)免疫試劑盒*直銷 人 CST2 基因全長ORF克隆人琥珀酰輔A合成(SCS)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 CDKL4 基因全長ORF克隆人紅細(xì)胞原卟啉(EP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 I型HDAC抑制劑(4SC-202 free base)μ-opioid受體激動劑 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg Endomorphin 11g 潮 B Hygromycin B 4℃保存 速激肽NK1受體激動劑 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg [Sar9,Met(O2)11]-Substance P50T 藍(lán)舌病毒PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 TrkB/TrkC神經(jīng)營養(yǎng)因子受體激活劑 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg LM22B-105mL 成纖維細(xì)胞生長因子-2 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存 EAAT1抑制劑(UCPH-101) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg UCPH-10125mL Agarose Gel Loading Buffer-Glycero (甘油型上樣液),6X Agarose Gel Loading Buffer-Glycero ,6X 常溫保存 TREK-1和TREK-2激活劑(ML335) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg ML33510mL DNA上樣液 (紅色),6×(非甘油) DNAON 4℃保存 5-HT2A受體反向激動劑 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg Pimavanserin tartrate2 ug pGL4.17[luc2/Neo] pGL4.17[luc2/Neo] 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 phosphodiesterase9抑制劑 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg BAY 73-6691 racemate抗生素檢定培養(yǎng)基1號(低pH) AntibioticAgar 250g TREK-1激活劑(ML402) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg ML4021瓶 CRT細(xì)胞株 CRT 低溫運(yùn)輸和保存 5-HT3受體和鉀通道抑制劑(Eucalyptol) 1mL(10mM)|50mg EucalyptolTCBS瓊脂平板(9cm) Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar 10個/包 Sigma-1受體激動劑 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg AVex-73 hydrochloride100mg 辣根過氧化物,偶聯(lián)級 Horseradish Peroxidase,Conjugation Grade -20℃保存 α/β水解酶結(jié)構(gòu)域6(ABHD6)抑制劑(WWL70) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg WWL70250mL PIPES Buffer,1.0M, pH6.8 PIPES Buffer,1.0M, pH6.8 常溫保存
|