中文名稱：微管多聚抑制劑(BNC105)

英文名稱：BNC105

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8273

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人 NFkB1 基因全長ORF克隆犬CD8分子(CD8)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 LXN / Latexin 基因全長ORF克隆犬CD6分子(CD6)免疫試劑盒*直銷

人 FGF7 / KGF 基因全長ORF克隆犬CD4分子(CD4)免疫試劑盒進口、組裝

人 DDR2 Kinase / CD167b 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆犬CD31分子(CD31)免疫試劑盒進口、分裝

人 LAYN / Layilin 基因全長ORF克隆犬CC趨化因子受體2(CCR2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 IGFBP5 基因全長ORF克隆犬B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)免疫試劑盒*直銷

人 E-Cadherin 基因全長ORF克隆犬B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)免疫試劑盒進口、組裝

人 ErbB3 / HER3 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆犬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)免疫試劑盒進口、分裝

人 CD209 / DC-SIGN 基因全長ORF克隆犬5羥色胺(5-HT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 KLK-13 基因全長ORF克隆犬Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)免疫試劑盒*直銷

人 JAM-A 基因全長ORF克隆犬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)免疫試劑盒進口、組裝

微管多聚抑制劑(BNC105)血清中的鐵含量測定試劑盒(比色法)  50管/48樣  serum iron assay kit2mg 辣根過氧化物標(biāo)記親和素 HRP-Avidin -20℃保存

亞硝酸鹽測定試劑盒(比色法)  100管/96樣  nitrite assay kit250mL Sodium Carbonate Solution（鈉溶液）,0.5M,pH10   Sodium Carbonate Solution,0.5M,pH10   常溫保存

糖化血清蛋白測定試劑盒(果糖胺法)(帶標(biāo)準(zhǔn))  50管/48樣|25管/24樣  Glycosylated serum protein assay kit1 管 Top腸桿菌 0 E.coli Strain -80℃保存

唾液酸測定試劑盒(帶SA標(biāo)準(zhǔn))(比色法)  50管/48樣  Sialic acid assay kit2 ug pSEP1 pSEP1 低溫運輸，-20℃保存

D-木糖測定試劑盒(比色法)  50管/48樣  D-Xylose assay kit50次 柱式土壤RNAout Column Soil RNAOUT 4℃保存

肌酸激酶測定試劑盒(比色法)  50管/24樣  Creatine kinase assay kit2 ug pcGlobin2-Cre pcGlobin2-Cre 低溫運輸，-20℃保存

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶試劑盒(比色法)  50管/24樣  β-N-acetyl-glucosaminidase assay kitISP培養(yǎng)基2 ISP Medium 2 250g

銅藍(lán)蛋白測定試劑盒(測血清，除雞血清)(比色法)  50管/48樣  Ceruloplasmin assay kit25mg 章魚堿 (+)-Octopine  -20℃保存

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶測定試劑盒(測紅細(xì)胞)(比色法)  100管/30樣  Glucose-6-phosphate dehydrogenase assay kit50T 禽腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

總氨基酸測定試劑盒(比色法)  80管/78樣  Total Amino Acid assay kit1 mg MM1-43（FM®1-43） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

琥珀酸脫氫酶試劑盒(比色法)  50管/48樣  Succinate Dehydrogenase assay kit100mL CAPS Buffer,0.5M,pH9.5  CAPS Buffer,0.5M,pH9.5  常溫保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)