產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細(xì)介紹：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

穗花杉雙黃酮

英文名：   Amentoflavone

英文別名：   Didemethyl-ginkgetin Amentoflavone; 8-(5-(5,7-dihydroxy-4-oxo-4H-chromen-2-yl)-2-hydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one

CAS登錄號(hào)：   1617-53-4

分子式：   C30H18O10

黃杞苷

英文別名：   3-((6-Deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)oxy)-2,3-dihydro-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one (2R-trans)

CAS登錄號(hào)：   572-31-6

分子式：   C21H22O10

分子量：   434.39

8-O-乙酰山梔苷甲酯

英文別名：   Barlerin

CAS登錄號(hào)：   57420-46-9

分子式：   C19H28O12

分子量：   448.42

山梔苷甲酯

英文別名：   Cyclopenta(C)pyran-4-carboxylic acid, 1-(beta-D-glucopyranosyloxy)-1,4A,5,6,7,7A-hexahydro-5,7-dihydroxy-7-methyl-, methyl ester, (1S-(1alpha,4aalpha,5alpha,7alpha,7aalpha))

CAS登錄號(hào)：   64421-28-9

分子式：   C17H26O11

分子量：   406.38

京尼平苷酸

英文名：   Geniposidic acid

英文別名：   (1R,2S,6S)-9-(Hydroxymethyl)-2-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3-oxabicyclo[4.3.0]nona-4,8-diene-5-carboxylic acid

CAS登錄號(hào)：   27741-01-1

分子式：   C16H22O10

特女貞苷

英文別名：   Nuezhenide 2-(4-Hydroxyphenyl)ethyl-6-(3-ethylidene-2-(beta-D-glucopyranosyloxyl)-3,4-dihydro-5-(methoxycarbonyl)-2H-pyran-4-acetate)-beta-D-glucopyranoside beta-D-Glucopyranoside, 2-(4-hydroxyphenyl)ethyl, 6-(3-ethylidene-2-(beta-D-glucopyranosyloxy)-3,4-dihydro-5-(methoxycarbonyl)-2H-pyran-4-acetate), trans

CAS登錄號(hào)：   39011-92-2

分子式：   C31H42O17

分子量：   686.62

楊梅苷

英文名：   Myricetrin

英文別名：   3-[(6-deoxy-α-L-mannopyranosyl)oxy]-5,7-dihydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-4H-benzopyran-4-one

CAS登錄號(hào)：   17912-87-7

分子式：   C21H20O12

原阿片堿

英文名：   Protopine

英文別名：   4,6,7,14-Tetrahydro-5-methyl-bis[1,3]benzodioxolo[4,5-c-5',6'-g] azecin-13(5H)-one

CAS登錄號(hào)：   130-86-9

分子式：   C20H19O5

原兒茶醛

英文名：   3,4-Dihydroxybenzaldehyde

英文別名：   Protocatechuic aldehyde

CAS登錄號(hào)：   139-85-5

分子式：   C7H6O3

地榆皂苷I

英文名：   Ziyuglycoside I

英文別名：   3-O-alpha-L-Arabinopyranosylpomolic acid beta-D-glucopyranosyl ester;Kudinoside H;Zigu-glucoside I

CAS登錄號(hào)：   35286-58-9

分子式：   C41H66O13

地榆皂苷II

英文別名：   (3beta)-3-(alpha-L-Arabinopyranosyloxy)-19-hydroxyurs-12-en-28-oic acid;Zigu-glucoside II

CAS登錄號(hào)：   35286-59-0

分子式：   C35H56O8

分子量：   604.81

Mer磷酸化抑制劑(UNC2250)Hoechst33342染色液(1mg/ml)  1ml|5×1ml  Hoechst33342 Staining Solution(1mg/ml)1nmol EcoR I-Not I-BamH I接頭 EcoR I-Not I-BamH I Adaptors -20℃保存

Hoechst33342染色液(含封片劑)  10ml  Hoechst33342 Staining Solution2 ug pMXS-GL (2000 ng) pMXS-GL (2000 ng) 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

Hoechst33258/PI細(xì)胞凋亡染色試劑盒  100T  white培養(yǎng)基 White Medium 250g

Hoechst33342/PI細(xì)胞凋亡染色試劑盒  100T  500mL Gelatin Blocking Buffer in PBS with azide   Gelatin Blocking Buffer in PBS with azide   常溫保存

碘化丙啶PI染色液(50μg/ml)  10ml  醋酸鉛培養(yǎng)基 Lead Acetate Medium 250g

碘化丙啶PI染色液(50μg/ml,含RNase)  10ml  5g 固綠 Fast Green FCF 室溫干燥保存

碘化丙啶PI染色液(1mg/ml)  1ml|10×1ml  50T 副雞嗜血桿菌PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒  50T  100mg 5-溴-4-氯-3-  BCIP -20℃保存

細(xì)胞凋亡-Hoechst染色試劑盒  100T  2 ug pBlueScriptR PEX5L pBlueScriptR PEX5L 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

AO染色液(1mg/ml)  10ml  1.5mL 非RNA清除劑2.0 RNA Erasol 2.0 4℃保存

AO熒光染色試劑盒  100T  2 ug pET-9d pET-9d 低溫運(yùn)輸，-20℃保存