操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：sFRP-1抑制劑(WAY 316606)

英文名稱：WAY 316606

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8299

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

小鼠 IL9 基因全長ORF克隆綿羊甘油醛-3-脫氫(GAPDH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

小鼠 IL1F10 基因全長ORF克隆綿羊肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)免疫試劑盒*直銷

小鼠 IL1RN 基因全長ORF克隆綿羊肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)免疫試劑盒進口、組裝

小鼠 IL10RA 基因全長ORF克隆綿羊非酯化脂肪酸(NEFA)免疫試劑盒進口、分裝

小鼠 DIAP2 基因全長ORF克隆綿羊二醇受體(ER-Alpha)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

小鼠 ITGA2B 基因全長ORF克隆綿羊彈性蛋白2,中性粒細胞(ELA2)免疫試劑盒*直銷

小鼠 IL23R 基因全長ORF克隆綿羊催產(chǎn)素(OT)免疫試劑盒進口、組裝

小鼠 IL15RA 基因全長ORF克隆綿羊雌二醇(E2)免疫試劑盒進口、分裝

小鼠 IgG3-Fc 基因ORF克隆 (非全長)綿羊成纖維細胞生長因子23(FGF23)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

小鼠 IgG2b-Fc 基因ORF克隆 (非全長)綿羊補體片段3b受體(C3bR)免疫試劑盒*直銷

小鼠 IgG2a-Fc 基因ORF克隆 (非全長)綿羊補體片段3a(C3a)免疫試劑盒進口、組裝

sFRP-1抑制劑(WAY 316606)線粒體檸檬酸(MCA)含量測試盒(微量法)  100管/96樣  2 ug pIRES2-DsRed pIRES2-DsRed 低溫運輸，-20℃保存

線粒體檸檬酸(MCA)含量測試盒(紫外分光光度法)  50管/48樣|25管/24樣  硝酸鹽還原試劑盒  5ml*4

乳酸含量測試盒(微量法)  100管/48樣  1瓶 Li-7細胞株 Li-7 低溫運輸和保存

乳酸含量測試盒(可見分光光度法)  50管/24樣  月桂基硫酸鹽蛋白胨肉湯-MUG LST-MUG 1000ml

己糖激酶(HK)測試盒(微量法)  100管/96樣  100mg 膠原Ⅱ型 Collagenase Type Ⅱ 4℃保存

己糖激酶(HK)測試盒(可見分光光度法)  50管/48樣  250mL Succinate Buffer（琥珀酸緩沖液）,0.2M,pH4.0  Succinate Buffer,0.2M,pH4.0  常溫保存

磷酸果糖激酶(PFK)/6-磷酸果糖激酶/果糖-6-磷酸激酶測試盒(微量法)  100管/96樣  50次 細胞核蛋白提取試劑盒  

磷酸果糖激酶(PFK)/6-磷酸果糖激酶/果糖-6-磷酸激酶測試盒(紫外分光光度法)  50管/48樣  2 ug psiRNAH1-neo psiRNAH1-neo 低溫運輸，-20℃保存

3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測試盒(微量法)  100管/96樣  5ug 標記的Oligo（dT） Biotinylated Oligo (dT) 常溫

3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)測試盒(紫外分光光度法)  50管/48樣|25管/24樣  2 ug pET-9a pET-9a 低溫運輸，-20℃保存

果糖-1,6-二磷酸(FDP)測試盒(微量法)  100管/48樣  霉菌和酵母菌顯色培養(yǎng)基  1000(ML)