操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:Hoechst33258染色液 英文名稱:Hoechst33258 Staining Solution 產(chǎn)品規(guī)格:10ml|50ml 產(chǎn)品貨號:BJ-01X6677 用途: 細胞凋亡檢測、普通細胞核染色、常規(guī)的DNA染色。 注意事項: Hoechst33258是一種熒光染料,可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,對細胞的毒性較低。染色染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。可直接用于固定細胞或組織的細胞核染色,也可直接用于活細胞或組織的細胞核染色。 儲存條件:-20℃,避光,6個月 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 200U 9°Nm DNA聚合 9°Nm DNA Polymerase -20℃保存 0.78-50 ng/mL 伯氏疏螺旋體(BB)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 250mL RNase-free 75%乙醇 常溫 2 ug pTALETF_v2 (NN) pTALETF_v2 (NN) 低溫運輸,-20℃保存DNA甲基綠瓊脂基礎(chǔ) 進口、國產(chǎn)Dnase Agar Base with Methyl Green用于彎曲桿菌的DNA水解試驗(GB標(biāo)準(zhǔn))100 100次 真菌種屬鑒定 PCR Mix 2(UN) Fungal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Adenosine deaminase domain-containing protein 1 1瓶 P3X63Ag8株 P3X63Ag8 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL 人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA試劑盒 1瓶 Hela-GFP株 Hela-GFP 低溫運輸和保存 梭菌鑒別瓊脂(DCA) Differentia Clostridial Agar 250g 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Urocortin 沙氏葡萄糖肉湯(usp) Sabouraud-dextrose Broth 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Secretogranin-3 1個 熒光尺 Fluorescent Ruler 室溫 1.56-100 ng/mL 人分泌性卷曲相關(guān)蛋白5(sFRP-5)ELISA試劑盒 50T 副流感病毒Ⅰ型PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存SOB瓊脂進口、國產(chǎn)SOB Agar250克BR 氯化鈉蛋白胨緩沖液顆粒 Buffered Sodium Chloride Peptone Solution 250g 0.312-20 ng/mL 人β4(T beta-4)ELISA試劑盒 Hoechst33258染色液豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ)免疫試劑盒進口、組裝 人15-epi-氧脂素 A4(15-epi-LXA4)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠血栓素A2(TXA2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 綿羊孕酮受體(PGR)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠過氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)免疫試劑盒*直銷 猴E選擇素(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 豚鼠白介素17(IL-17)免疫試劑盒進口、分裝 大鼠ⅩⅢ(FⅩⅢ)免疫試劑盒進口、組裝 人組蛋白乙酰化(HAT)免疫試劑盒進口、分裝 大鼠超氧化物歧化1,可溶性(SOD1)免疫試劑盒進口、分裝 人胃動素(MTL)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
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