培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí); 4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 產(chǎn)品參數(shù): 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) | MTH1(NUDT1)抑制劑(TH287) | TH287 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | BJ-01X8064 |
商品詳細(xì)介紹: TH287是MTH1(NUDT1)高效選擇性抑制劑,IC50值0.8nM,對(duì)MTH2,NUDT5,NUDT12,NUDT14等抑制力弱。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :1609960-30-6 純度:98.11% 分子量:269.13 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明: 1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點(diǎn): 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 人 RELL2 基因全長ORF克隆人細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 NCR1 基因全長ORF克隆人細(xì)胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 CNPY2 基因全長ORF克隆人細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒*直銷 人 SIRPB1 基因全長ORF克隆人細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 PRRG2 基因全長ORF克隆人細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A(CagA)抗體(IgG)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 CGB 基因全長ORF克隆人細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A(CagA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 MMRN2 基因全長ORF克隆人細(xì)胞凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(PYCARD)免疫試劑盒*直銷 人 TNS4 基因全長ORF克隆人硒結(jié)合蛋白1(SELENBP1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 SIGLEC10 轉(zhuǎn)錄變體3 基因全長ORF克隆人硒蛋白P(SEPP1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 GALNT2 基因全長ORF克隆人戊型肝炎病毒抗體(IgM)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 PODNL1 基因全長ORF克隆人戊型肝炎病毒抗體(IgG)免疫試劑盒*直銷 MTH1(NUDT1)抑制劑(TH287)angiotensin II和endothelin A受體雙重抑制劑(Sparsentan) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg Sparsentan40uL×4 雙脫氧dNTP溶液(10mM) ddNTP Solution -20℃保存 LOXL2抑制劑(LOXL2-IN-1 hydrochloride) 1mL(10mM)|100mg LOXL2-IN-1 hydrochloride2 ug pLLP-STII pLLP-STII 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 PPARα激動(dòng)劑(GW7647) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg GW7647羽絨羽毛微生物檢驗(yàn) VEGFR2激酶抑制劑(SU5408) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg SU54081瓶 MV3細(xì)胞株 MV3 低溫運(yùn)輸和保存 adenylate cyclase抑制劑(CB-7921220) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg CB-7921220Voges-Proskauer(V-P)試劑 V-P Box 5ml*4 Na+/H+交換抑制劑(Eniporide hydrochloride) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg Eniporide hydrochloride1g 洋紅 Carmine 室溫干燥避光保存 HIF hydroxylase抑制劑(Desidustat) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg Desidustat1000mL Tris Buffered Saline(TBS),10X Tris Buffered Saline(TBS),10X 常溫保存 thrombin受體激動(dòng)劑(Sfllrnpndkyepf) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg Sfllrnpndkyepf10mL Sephacryl S-400基質(zhì) Sephacryl S-400 4℃保存 Lck抑制劑(RK-24466) 1mL(10mM)|1mg|5mg RK-244662 ug pTetOne pTetOne 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 KCa3.1激活劑(SKA-121) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg SKA-12150支 Oral Swab 常溫 apelin受體激動(dòng)劑([Pyr1]-Apelin-13) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg [Pyr1]-Apelin-132 ug pDsRed2.1 pDsRed2.1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
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