細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：芳香酶抑制劑(Testolactone)

英文名稱：Testolactone

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X8087

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

人 SHMT1 基因全長(zhǎng)ORF克隆人醇脫氫(SDH)免疫試劑盒*直銷

人 ASGR2 轉(zhuǎn)錄變體4 基因全長(zhǎng)ORF克隆人沙眼衣原體抗原(CT)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 ASGR2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆人沙眼衣原體抗體(IgA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 FKBP14 基因全長(zhǎng)ORF克隆人沙眼衣原體抗體(CT)IgG 免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 CHAD 基因全長(zhǎng)ORF克隆人沙漠刺猬因子(DHH)免疫試劑盒*直銷

人 IZUMO1 基因全長(zhǎng)ORF克隆人殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 EMILIN1 基因全長(zhǎng)ORF克隆人殺菌肽(cecropin)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 ASPHD2 基因全長(zhǎng)ORF克隆人色素上皮衍生因子(PEDF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 ANXA2 基因全長(zhǎng)ORF克隆人色氨酰tRNA合成(WARS)免疫試劑盒*直銷

人 KDSR 基因全長(zhǎng)ORF克隆人色羥化(TPH)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 BTN3A2 基因全長(zhǎng)ORF克隆人三角形四肽重復(fù)蛋白1(TTC1/TPR1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

芳香酶抑制劑(Testolactone)JAK1/JAK2抑制劑(Baricitinib)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg  Baricitinib鹽緩沖稀釋液（ph7.2）  9ml*20支

IL-轉(zhuǎn)化酶/caspase-1抑制劑(VX-765)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  VX-7651瓶 Ca761細(xì)胞株 Ca761 低溫運(yùn)輸和保存

CXCL8受體CXCR1/2變構(gòu)抑制劑（Reparixin）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg  ReparixinO157顯色培養(yǎng)基 O157 chromogenic medium 1000(ML)

JAK1/2抑制劑（Ruxolitinib phosphate）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg  Ruxolitinib phosphate500U Bst DNA 聚合，全長(zhǎng) Bst DNA Polymerase, Full Length -20℃保存

磷脂酶C/磷脂酶A2/和5-脂氧合酶抑制劑(U-73122)  5mg|10mg|50mg  U-73122500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH7.4   Phosphate Buffer，0.2M, pH7.4   常溫保存

糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑（Dexamethasone）  1mL(10mM)|1g|5g  Dexamethasone0.1mL×10 Rosetta (DE3) pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 Rosetta (DE3) pLysS Competent Cell -80℃保存

CYP26A1和CYP26B1抑制劑（Talarozole）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Talarozole2 ug pOJ260 pOJ260 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

MyD88同源二聚化抑制劑(ST 2825)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg  ST 2825R3增殖培養(yǎng)基  250g

SIK抑制劑(HG-9-91-01)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  HG-9-91-011瓶 U87MG細(xì)胞株 U87MG 低溫運(yùn)輸和保存

NF-κB抑制劑(BAY 11-7082)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  BAY 11-7082MUCAP試劑 MUCAP reagent 2ml*4支/盒

calcineurin抑制劑(Cyclosporin A)  1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg  Cyclosporin A1000U 葡萄糖 -6- 脫氫 G6P-DH -20℃保存