產(chǎn)品參數(shù)： 中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) | Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 |
| 50T|100T | BJ-01X6498 |
商品詳細(xì)介紹： 產(chǎn)品背景： 細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過(guò)程等方面起著十分重要的作用。 在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過(guò)程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過(guò)程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過(guò)程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS 高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測(cè)標(biāo)志事件。 檢測(cè)原理： 在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲(phosphotidylserine，PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細(xì)胞中，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。 Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結(jié)合?？赏ㄟ^(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。用標(biāo)記了APC的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過(guò)程中也會(huì)發(fā)生細(xì)胞膜損傷，壞死的細(xì)胞會(huì)結(jié)合Annexin V-APC。 Annexin V-APC 通常與細(xì)胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測(cè)凋亡細(xì)胞。常用的染料是7-AAD。正常細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞，7-AAD 能夠透過(guò)細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。 7-AAD/Annexin V-APC試劑盒將Annexin Ⅴ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。壞死細(xì)胞可以同時(shí)與Annexin V-APC和7-AAD 結(jié)合顯色，而7-AAD 則被排除在活細(xì)胞(APC陰性)和早期凋亡細(xì)胞(APC陽(yáng)性)之外。在沒(méi)有巨噬細(xì)胞的情況下，凋亡的后階段會(huì)像細(xì)胞壞死一樣發(fā)生整個(gè)細(xì)胞的解體，從而使凋亡晚期的細(xì)胞也同時(shí)被APC和7-AAD 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽(yáng)性。 儲(chǔ)存條件：染色液2-8℃避光保存；結(jié)合液2-8℃保存；長(zhǎng)期不用-20℃保存。 Annexin V-APC染色液避免反復(fù)凍融，凍融2次以上可能會(huì)失效。長(zhǎng)期保存分裝后-20℃保存。 有效期：一年。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告： 一、分離與培養(yǎng)： 1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。 培養(yǎng)操作步驟 ： 1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中； 5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明： 1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點(diǎn)： 1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6）第二天觀(guān)察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 Gymnosporangium clavipes榲桲銹病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Diarrheagenic Escherichia coli致瀉性大腸桿（致瀉性大腸埃希氏）通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒，停 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Arillus longan龍眼肉探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Polyoma Virus(Py)多瘤病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒，停產(chǎn) 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Endoconcha sepiae海螵蛸PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Louping Ill Virus跳躍病病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Avian Adenovirus禽腺病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 1-2周 魚(yú)源性成分LAMP試劑盒 種源性檢測(cè)/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Avian Leukosis Virus(ALV)禽白血病病毒H亞群RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Beauveria bassiana球孢白僵LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Babesia motasi莫氏巴貝斯蟲(chóng)LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Human Immunodeficiency Virus 2(HIV-2)人免疫缺陷病毒II型A組前病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)免疫試劑盒*直銷(xiāo) 雞丙二酸單酰輔A(malonyl CoA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 小鼠FAM84A蛋白(FAM84A)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 大鼠透明質(zhì)酸(HA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 兔多肽YY(PYY)免疫試劑盒*直銷(xiāo) 大鼠孤腓肽(OFQ/N)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人血管生長(zhǎng)素(ANG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 倉(cāng)鼠白介素8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒*直銷(xiāo) 人親環(huán)蛋白A(PPIA/CYPA)免疫試劑盒*直銷(xiāo) M-Endo肉湯 英文名稱(chēng)：M-Endo Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人抗磷脂酰乙醇胺抗體(IgM)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 |
設(shè)為主頁(yè)
加入收藏
聯(lián)系我們
點(diǎn)擊放大
會(huì)員_a.png)