中文名稱：Polo-like Kinase1(PLK1)抑制劑(Poloxin)

英文名稱：Poloxin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X7843

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

金色酰胺醇酯

英文別名：   Acetic acid (2S)-2-[[(2S)-2-(benzoylamino)-3-phenylpropionyl]amino]-3-phenylpropyl ester

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C27H28N2O4

分子量：   444.52

林澤蘭內(nèi)酯D

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C15H19ClO5

分子量：   314.09

分子結(jié)構(gòu)：     

林澤蘭內(nèi)酯C

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C20H24O7

分子量：   376.15

分子結(jié)構(gòu)：     

林澤蘭內(nèi)酯B

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C20H24O6

分子量：   360.16

分子結(jié)構(gòu)：     

蒲公英甾醇乙酸酯

英文名：   Taraxasteryl acetate

英文別名：   18α,19α)-5α-Urs-20(30)-en-3β-ol acetate

CAS登錄號(hào)：   6426-43-3

分子式：   C32H52O2

15-羥基松香酸

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C20H30O3

分子量：   318.45

分子結(jié)構(gòu)：     

氯化木蘭花堿

英文名：   Magnoflorine chloride

英文別名：   (6aS)-5,6,6a,7-Tetrahydro-1,11-dihydroxy-2,10-dimethoxy-6,6-dimethyl-4H-dibenzo[de,g]quinolinium chloride;

CAS登錄號(hào)：   6681-18-1

分子式：   C20H24NO4.Cl

金合歡素

英文名：   Acacetin

英文別名：   5,7-Dihydroxy-4'-methoxyflavone; 5,7-dihydroxy-2-(4-methoxyphenyl)-4-benzopyrone

CAS登錄號(hào)：   480-44-4

分子式：   C16H12O5

苦玄參苷ⅠB

英文名：   Piefeltarraenin ⅠB

英文別名：   picfeltarrargenin I3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1-2)-O-β-D-glucopyranoside

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子式：   C42H64O14

常春藤皂苷B

英文名：   Hederasaponin B

英文別名：   3β-(2-O-α-L-Rhamnopyranosyl-α-L-arabinopyranosyloxy)oleana-12-ene-28-oic acid 6-O-(4-O-α-L-rhamnopyranosyl-β-D-glucopyranosyl)-β-D-glucopyranosyl ester

CAS登錄號(hào)：   36284-77-2

分子式：   C59H96O25

黃芪總皂苷

英文名：   Astragaloside

CAS登錄號(hào)：   新品待定

分子結(jié)構(gòu)：     

外觀：   白色粉末

Polo-like Kinase1(PLK1)抑制劑(Poloxin)Caspase-4活性測(cè)定試劑盒  20T|50T|100T  Caspase-4 Activity colorimetric assay Kit20 T 乙酰轉(zhuǎn)移測(cè)試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

Caspase-3活性測(cè)定試劑盒  20T|50T|100T  Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit2 ug pCMV5-Myc pCMV5-Myc 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

Caspase-2活性測(cè)定試劑盒  20T|50T|100T  Caspase-2 Activity colorimetric assay Kit綜合馬鈴薯培養(yǎng)基 Intergrated Potato Medium 250g

Caspase-1活性測(cè)定試劑盒  20T|50T|100T  Caspase 1 Activity colorimetric assay Kit10g 硫酸新 Neomycin Trisulfate Salt Hydrate 室溫保存

AO-EB雙染色試劑盒  50ml*2|250ml*2  Acridine Orange(AO)/EB Double Stain Kit50T 侵襲性大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

JC-10熒光探針  1mg|5mg  JC-1025 mg Fluorescein-5-maleimide Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)  100T  Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with JC-125mL Bovine Serum Albumin Solution（BSA溶液），20mg/mL Bovine Serum Albumin Solution，20mg/mL 常溫保存

MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒  250次|500次  MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit50次 膠回收及PCR片段純化兩用試劑盒 DNABACK & PCR Clean-Up Kit 常溫保存

細(xì)胞分離液    2 ug pGL3-Basic pGL3-Basic 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

人淋巴細(xì)胞分離液  200ml  30次 一站式Tricine-SDS-PAGE套裝 One-Stop Tricine-SDS-PAGE Pack 常溫保存（上樣液需要-20℃保存）

淋巴細(xì)胞分離液1.077  100ml  Lymphocyte Separation Medium 1.0771瓶 HELF細(xì)胞株 HELF 低溫運(yùn)輸和保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)