操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱：細胞凋亡線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-10) 英文名稱：JC-10 Apoptosis Detection Kit 產(chǎn)品規(guī)格：10T|20T|50T|100T 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6383 本試劑盒可應(yīng)用于細胞、組織或純化的線粒體膜電位檢測。大量的研究表明線粒體與細胞凋亡密切相關(guān)，其中線粒體跨膜電位（△?）的破壞，被認為是細胞凋亡級聯(lián)反應(yīng)過程中早發(fā)生的事件之一，它發(fā)生在細胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前，一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。 本試劑盒采用JC-10 (Enhanced JC-1)一種陽離子脂質(zhì)熒光染料作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-100 可以選擇性地進入線粒體，且由于膜電位的增加，其顏色會發(fā)生從綠色到橙色的可逆性改變。這種特性是由于JC-100 聚合物的可逆結(jié)構(gòu)，在膜極化條件下，它的發(fā)射光由520nm(JC-100 單體發(fā)射光)轉(zhuǎn)移到570nm (J-聚合體發(fā)射光)。當(dāng)在490nm 處激發(fā)時，JC-100 發(fā)生從綠色到橙綠色的可逆改變。這兩種顏色都可以被流式細胞儀上裝好的一般濾光器檢測到，因此綠色發(fā)射光可以通過熒光通道1（FL1）進行分析，橙綠色發(fā)射光可以通過熒光通道2（FL2）進行分析。它除了有潛力用于流式細胞術(shù)，也可以用于熒光成像分析。 注意事項 1. 微量試劑取用前請離心集液。 2. JC-10 避光保存及使用。 3. 細胞培養(yǎng)至匯合度80-90%，收集細胞量在1×106/Test。 4. 對PH 變化過于敏感的細胞建議用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗滌，或延長觀測時間。 5. 流式細胞儀檢測線粒體膜電位變化受到多種因素的影響，因誘導(dǎo)劑、細胞株類型，作用時間的不同而熒光強度比例都有不同，因此沒有通用標(biāo)準(zhǔn)的補償設(shè)門指南，因此每個試驗需設(shè)陰性及陽性對照組進行熒光補償及設(shè)門。 6. 組織需先制備單細胞懸液或提取純化線粒體后方可進行檢測，可選用我司細胞懸液制備試劑盒或線粒體提取試劑盒。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備： 1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 鱈魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Dichelobacter nodosus節(jié)瘤擬桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Rhizoma ligustici藁本PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Human T-cell Lymphoma Virus 1(HTLV-1)人類嗜T淋巴 病毒1型RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Mycoplasma genitalium生殖支原體LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Rhizoma pinelliae半夏LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Radix aconiti lateralis preparata附子LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Bacillus anthracis炭疽芽孢桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 1-2周 Culex spp.庫蚊通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Didymella lycopersici Klebahn番茄亞隔孢殼莖腐病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Herba asari細辛LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Singapore Grouper Iridovirus(SGIV)新加坡石斑魚虹彩病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 細胞凋亡線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-10)改良EC肉湯(mEC+n) 英文名稱：Modified EC Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 石蠟切片組織ER BETA 蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次 大腸桿菌噬菌體MS2半固體培養(yǎng)基 英文名稱：Coliphage MS2 Medium(Semisolid) 產(chǎn)品規(guī)格：250g 細胞糖原連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒 20次 CYP2B1蛋白表達西方雜交分析試劑盒 5次 體液KSHV（KAPOSI SARCOMA-ASSOCIATED HERPESVIRUS）病毒定性檢測試劑盒 20次 電泳分析試劑盒 細胞衰老特異性晚期脂褐素堿性品紅 50次 載玻片細胞MYC蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次 細胞CREB蛋白表達比色法定量檢測試劑盒 10/50 次 裂解液VII：細裂解溶液 20/50次 |
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