操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱：阿爾瑪藍(lán) 英文名稱：Alamar Blue 產(chǎn)品規(guī)格：100T 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6453 阿爾瑪藍(lán)（Alamar Blue）是一種氧化還原指示劑，能根據(jù)代謝活性產(chǎn)生吸亮度變化和熒光信號。這是一種安全無毒的染料，可用于細(xì)胞活性和細(xì)胞增殖的定量分析以及細(xì)胞因子生物測定和體外細(xì)胞毒性研究，能有效測定動物、真菌和細(xì)菌細(xì)胞的天然代謝活性。Alamar Blue在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，反映所研究的細(xì)胞或微生物對氧分子的消耗，因而常被用作氧化還原指示劑，以顯示被觀察細(xì)胞和細(xì)菌的代謝活動。這種測定是基于具有代謝活性的細(xì)胞將試劑轉(zhuǎn)換成熒光和比色指示劑的能力。在細(xì)胞增殖過程中，細(xì)胞內(nèi)NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，處于還原環(huán)境。攝入細(xì)胞內(nèi)的染料被這些代謝中間體及細(xì)胞色素類還原后釋放到細(xì)胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。受損和無活性細(xì)胞具有較低的天然代謝活性，因此對應(yīng)的信號較低?？梢杂闷胀ǚ止夤舛扔嫽驘晒夤舛扔嫏z測，其激發(fā)光波長在530-560 nm之間，發(fā)射光波長為590 nm。吸光度和熒光強(qiáng)度與活性細(xì)胞數(shù)成正比。 本品可廣泛地用于細(xì)胞增殖代謝，藥物的細(xì)胞毒作用的體外測定以及病原微生物的的快速檢測與鑒定。 與臺盼蘭、TTC、MTT、MTS等分析法相比，Alamar Blue具有更多的優(yōu)勢。Alamar Blue采用單一試劑，可以連續(xù)、快速地檢測細(xì)胞的增生狀態(tài)。由于Alamar Blue對細(xì)胞無毒、無害，不影響細(xì)胞的抗體合成與分泌等活性，因此可以對同一批細(xì)胞的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察，因此有操作簡便和幾乎不干擾細(xì)胞正常代謝的特點(diǎn)。 注意事項 1）需客戶自行準(zhǔn)備100%還原型Alamar Blue試劑。為得到還原型Alamar Blue，需配制Alamar Blue與細(xì)胞培養(yǎng)基的混合溶液，Alamar Blue與細(xì)胞培養(yǎng)基的比值為1:10，高壓滅菌15min。（不能對濃縮的Alamar Blue高壓滅菌，也不能用PBS配制溶液，因?yàn)?00%還原型Alamar Blue在PBS中不穩(wěn)定。） 2）為得到結(jié)果，建議實(shí)驗(yàn)前先摸索孵育時間和接種細(xì)胞數(shù)量。 3）合適密度的細(xì)胞可以增加檢測靈敏度。對于96 孔板，我們建議每孔接種100 微升細(xì)胞，細(xì)胞濃度范圍為：貼壁細(xì)胞在100-10,000/孔，懸浮細(xì)胞在2,000-50,000/孔，并以培養(yǎng)基為空白對照。對于384 孔板，細(xì)胞濃度和接種量均減半。 4）整個過程均應(yīng)為無菌操作，因?yàn)槲⑸镂廴疚锿瑯涌梢赃€原檢測試劑而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 5）注意接種細(xì)胞濃度和加入檢測試劑后孵育時間。細(xì)胞濃度過高或孵育時間過長，會導(dǎo)致繼發(fā)性還原反應(yīng)，產(chǎn)生無色和熒光消失。 6）孵育時，須避光。 7）本產(chǎn)品可以使用熒光或分光光度計檢測，但熒光的靈敏度高，實(shí)驗(yàn)誤差小，推薦使用熒光檢測。 儲存條件：4℃，有效期一年 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備： 1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細(xì)胞處理： 1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法： 1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Trichinella pseudospiralis偽旋毛蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Vibrio parahemolyticus副溶血性弧LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Arcanobacterium equi馬隱秘桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Sarcocystis spp.肉孢子蟲通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Semen pharbitidis牽牛子探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Neisseria meningitidis Group W腦膜炎奈瑟W群探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Feline Herpes Virus貓庖疹病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 ESBL-Escherichia coli超廣譜β-內(nèi)酰胺大腸桿（大腸埃希氏）探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Herba menthae薄荷探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 Enterovirus type 71（EV71）腸道病毒71型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 驢源性成分PCR檢測試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周 Radix ginseng人參探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周 阿爾瑪藍(lán)CDK4蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 5次 載玻片細(xì)胞JNK/SAPK蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次 體外非細(xì)胞系統(tǒng)血紅素氧合-1（HEME OXYGENASE-1）活性比色法定量檢測試劑盒 20次 BPL瓊脂 英文名稱：BPL Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 線蟲β-半乳糖苷比色法定量檢測試劑盒 20次 石蠟切片組織GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次 無內(nèi)小量質(zhì)粒抽提試劑盒 20/50次 酵母SD-TRP/HIS培養(yǎng)基 100毫升 胚胎干細(xì)胞基質(zhì)膠溶液 10毫升 石蠟切片組織GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次 SCDLP液體培養(yǎng)基 英文名稱：Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g
|
設(shè)為主頁
加入收藏
聯(lián)系我們
點(diǎn)擊放大
