中文名稱：Ral抑制劑(BQU57)

英文名稱：BQU57

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7973

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人 B3GNT1 基因全長ORF克隆小鼠c-jun 免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 RING1 基因全長ORF克隆小鼠c-fos 免疫試劑盒*直銷

人 RRAGC 基因全長ORF克隆小鼠CD8分子(CD8)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 SNIP1 基因全長ORF克隆小鼠CD4分子(CD4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 NCF1 基因全長ORF克隆小鼠CD45分子(CD45)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 PALM 基因全長ORF克隆小鼠CD44分子(CD44)免疫試劑盒*直銷

人 ETNK2 基因全長ORF克隆小鼠CD34分子(CD34)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 ACTL7A 基因全長ORF克隆小鼠CD33分子(CD33)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 IP6K2 基因全長ORF克隆小鼠CD30分子(CD30)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 ABHD2 基因全長ORF克隆小鼠CD19分子(CD19)免疫試劑盒*直銷

人 STAMBP 基因全長ORF克隆小鼠CC趨化因子受體6(CCR-6)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

Ral抑制劑(BQU57)SIRT1和SIRT2抑制劑（Tenovin-1）  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  Tenovin-150次 柱式凋亡DNAout Column Apoptotic DNAOUT 常溫

mTOR抑制劑（LY 303511 hydrochloride）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  LY 303511 hydrochloride1瓶 BALB/C 3T3細(xì)胞株 BALB/C 3T3 低溫運(yùn)輸和保存

PFKFB3抑制劑(PFK-015)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  PFK-015鹽增菌液（SC）顆粒 Selenite Cystine Broth 300ml/袋*10

Aurora抑制劑（CCT 137690）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  CCT 1376901套 克必隆eTS PCR產(chǎn)物差減雜交試劑盒  

突變型IDH1R132H抑制劑（Mutant IDH1 inhibitor）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Mutant IDH1 inhibitor500mL Normal Tyrode’s Bicarbonate Buffered Solution  Normal Tyrode’s Bicarbonate Buffered Solution  常溫保存

MEK5/ERK5抑制劑（BIX02189）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  BIX0218950ng 可保種型藍(lán)白T載體 Blue-White Vector T -20℃保存

MEK1/2抑制劑（AZD8330）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  AZD83302 ug pmR-mCherry pmR-mCherry 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

Btk激酶抑制劑(LFM-A13)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  LFM-A13干酪素  250g

Aurora A和B抑制劑(TAK-901)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  TAK-9011瓶 TM4細(xì)胞株 TM4 低溫運(yùn)輸和保存

G-四聯(lián)體結(jié)構(gòu)抑制劑（360A iodide）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  360A iodideBM液體培養(yǎng)基  250g

IKK-2抑制劑（SC-514）  1mL(10mM)|10mg|50mg  SC-514100mL 供體馬血清 Donor Equine Serum -20℃保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)