培養(yǎng)操作步驟 ： 1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中； 5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。 產(chǎn)品參數(shù)： 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 | 吉姆薩染色液 | Giemsa Stain Solution | 100ml | BJ-01X6582 |
商品詳細介紹： 本品以進口的吉姆薩色素、甲醇為主要原料，含*襯染劑，經(jīng)研磨配制而成，能呈現(xiàn)出清晰的細胞染色效果。經(jīng)常用于組織切片、血液和細胞涂片、細菌、染色體顯帶、原生動物寄生蟲等染色。吉姆薩染色液由吉姆薩貯存液(10×)和磷酸鹽緩沖液組成，10×貯存液可以單獨使用，也可以1:9混合成工作液后使用。 吉姆薩色素是由天青Ⅱ與伊紅混合而成。吉姆薩染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同，吉姆薩染色液對胞漿著色力較強，能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度，特別是對血液和骨髓細胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒，著色清晰，但是對細胞核著色偏深,核結(jié)構(gòu)顯色不佳，故吉姆薩染液常與瑞氏染液聯(lián)合使用。 一、一步法涂片染色 1、吉姆薩工作液的配制： 按吉姆薩貯存液(10×):磷酸鹽緩沖液=1:9混合，即取1份吉姆薩儲存液(10×)加入到9份的磷酸鹽緩沖液中充分混勻，即為吉姆薩工作液，該工作液為即用型試劑，不易保存，即用即配。 2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定1-3分鐘。 3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上，滴加吉姆薩工作液覆蓋涂片，室溫滴染。 4、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。 5、干燥、鏡檢。 6、染色結(jié)果： 嗜酸性顆?！奂t色； 嗜堿性顆?！纤{色； 中性顆?！仙?/span> 二、兩步法涂片染色 1、吉姆薩工作液的配制： 按吉姆薩貯存液(10×):蒸餾水=1:4混合，即取1份的吉姆薩貯存液(10×)加入到4份的蒸餾水中充分混勻，即為吉姆薩工作液。吉姆薩工作液為即用型試劑，不易保存，即用即配。 2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定。 3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上，滴加適量吉姆薩工作液覆蓋涂片，室溫滴染。 4、加入等量磷酸鹽緩沖液，輕輕晃動載玻片，室溫靜置。 5、用自來水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。 |
實驗報告： 一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 
實驗要點及說明： 1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。 操作要點： 1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。 5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。 Cheilospirura hamulosa唇飾帶線蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Nocardia transvalensis南非諾卡探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1O)人免疫缺陷病毒1型O群RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Chicken Embro Lethal Orphan Virus(CELOV)雞胚致死孤兒病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Xanthomonas campestris pv. alfalfae野油菜黃單胞苜蓿致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Bovine Enterovirus(BEV)牛腸道病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Human Parainfluenza Virus 3(HPIV-3)人副流感病毒3型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Trichophyton equinum馬毛癬LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Penicillium marneffei馬內(nèi)菲青霉探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Sanguis draxonis血竭LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 火雞源性成分PCR檢測試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Helminthosporium solani馬鈴薯銀屑病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 吉姆薩染色液山羊轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 大鼠鈣激活中性蛋白1(CAPN1)免疫試劑盒*直銷 人胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素(TSLP)免疫試劑盒進口、組裝 鹿次黃氧化免疫試劑盒進口、分裝 人前膠原C內(nèi)肽增強子1(PCOLCE1)免疫試劑盒進口、分裝 肉浸液肉湯培養(yǎng)基 英文名稱：Meat Infusion Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 3%過氧化氫試劑 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：2ml*20支 人肺炎衣原體抗體IgA(Cpn-IgA)免疫試劑盒*直銷 特殊蛋白胨 英文名稱：Peptone Special 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人α1酸性糖蛋白(α1-AGP)免疫試劑盒進口、組裝
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