操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱：細胞活力檢測試劑盒(化學發(fā)光法) 英文名稱：Luminescent Cell Viability Assay Kit 產品規(guī)格：100次|500次 產品貨號：BJ-01X6353 本試劑盒是一種通過化學發(fā)光法測定細胞內ATP含量從而來定量檢測活細胞數目的試劑盒。本試劑盒的性能和用途與Promega公司的同類產品基本相同，對于相同的細胞樣品本試劑盒的發(fā)光效果更強一些。 本試劑盒比常見的MTT、alamarBlue、Calcein-AM、WST-1、CCK-8等其它細胞活力測定方法更加簡單快捷。只需把試劑盒提供的檢測試劑與培養(yǎng)細胞等體積混合，反應10分鐘后即可進行化學發(fā)光檢測。無需洗滌細胞，也無需更換或去除培養(yǎng)液。并且化學發(fā)光非常穩(wěn)定，在反應開始后的10分鐘內無顯著變化，30分鐘內的下降不超過10%。 本試劑盒不僅適合少量樣品的檢測，也非常適合大量樣品的高通量篩選檢測。 本試劑盒線性范圍廣，檢測靈敏度高。用96孔板進行檢測時，本試劑盒在0-50,000個細胞/孔的細胞密度范圍內有良好的檢測效果，并且在僅有幾百個細胞時仍有良好的線性關系。當細胞數量僅為50個/孔時，發(fā)光強度可達空白孔的5倍左右。 ATP，作為重要的能量分子，在細胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP是細胞新陳代謝的一個重要指標，也是具有代謝活性細胞的重要標志性分子，并和活細胞數目成良好的線性關系。因此，ATP含量能很好地反應活細胞的數目，即本試劑盒可以通過測定ATP含量來進行細胞計數或檢測細胞活力。 本試劑盒通過ATP檢測細胞活力的原理參考下圖。借助ATP依賴的螢光素酶催化的螢光素發(fā)光反應，ATP可以通過測定化學發(fā)光來進行定量。由于ATP含量能很好地反映活細胞的數目，而ATP含量和發(fā)光強度成正比，這樣就可以簡單地通過化學發(fā)光強度來計算出細胞活力或細胞數目。 細胞活力檢測試劑盒(化學發(fā)光法)檢測ATP的原理圖 對于96孔板，我們推薦使用100μl細胞培養(yǎng)液和100μl的檢測試劑，總體積為200μl，此時本試劑盒可以進行100次檢測。對于384孔板，我們推薦使用25μl細胞培養(yǎng)液和25μl的檢測試劑，總體積為50μl，此時本試劑盒可以進行400次檢測。也可以用其它體積的試劑進行檢測，但細胞培養(yǎng)液和檢測試劑體積的比例必須為1:1。 儲存條件：室溫，有效期2年。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。 二． 細胞處理： 1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。 Folium sennae 番瀉葉LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Globicatella sanguinis血球鏈染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 開心果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Cladosporium spp.枝孢霉通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Bovine Herpes Mammillitis Virus(BHMV)牛皰疹炎病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Theileria parva小泰勒蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Sanguis draxonis血竭染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Equine Herpesvirus 4 (EHV-4)馬皰疹病毒4型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Radix sophorae flavescentis苦參LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Cortex phellodendri黃柏染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Salmonella newport新港沙門氏LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Rhizoma anemarrhenae知母LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 細胞活力檢測試劑盒(化學發(fā)光法)小量酵母細胞*轉化試劑盒 20次 冰凍切片組織PP2A蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次 細胞基質金屬蛋白 3H同位素標記檢測試劑盒 20次 真/酵母細胞內氧化應激活性氧（ROS）魯米諾化學發(fā)光法 50次 糞便細胞DNA分離試劑盒 50次 擴增檢測試劑盒 組織還原型甘肽（GSH）濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒 50次 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基顆粒 英文名稱：Thioglycollate Medium 產品規(guī)格：300ml/袋*10 無氮培養(yǎng)基 英文名稱：Nitrogen-free Culture-medium 產品規(guī)格：250g 線粒體復合物I蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒 25次 真/酵母磷脂D2（Phospholipase D2）活性熒光定量檢測試劑盒 20次
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