操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

中文名稱：Wnt/beta-catenin信號轉(zhuǎn)到抑制劑（WIKI4）

英文名稱：WIKI4

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8111

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

人 GMFB 基因全長ORF克隆人氯離子胞內(nèi)通道蛋白4(CLIC4)免疫試劑盒*直銷

人 CST9L 基因全長ORF克隆人綠膿桿菌外毒素A(PEA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 AZGP1 基因全長ORF克隆人硫脂抗體免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 EGFL8 基因全長ORF克隆人硫氧還蛋白域包含蛋白6(TXNDC6)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 CARTPT 基因全長ORF克隆人硫氧還蛋白依賴性過氧化物還原，線粒體(PRDX3)免疫試劑盒*直銷

人 UCN2 基因全長ORF克隆人硫氧還蛋白還原(TrxR)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 PIANP / C12ORF53 基因全長ORF克隆人硫氧還蛋白,線粒體(TXN2)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 KRT17 基因全長ORF克隆人硫氧化還原蛋白(Trx)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 CALD1 基因全長ORF克隆人硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)免疫試劑盒*直銷

人 CALCA 基因全長ORF克隆人硫酸褪黑色素(MS)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 TMED3 基因全長ORF克隆人蛋白聚糖5(CSPG5)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

Wnt/beta-catenin信號轉(zhuǎn)到抑制劑（WIKI4）SCF/c-Kit抑制劑(ISCK03)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  ISCK031瓶 Jurkat,Clone E6-1 [Jurkat E6-1]細(xì)胞株 Jurkat,Clone E6-1 [Jurkat E6-1] 低溫運(yùn)輸和保存

糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑（Beclometasone）  1mL(10mM)  BeclometasoneSB培養(yǎng)基 SB Medium 250g

COX-2抑制劑(Rutaecarpine)  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  Rutaecarpine500µg T4 噬菌體基因 32 蛋白 T4 Gene 33 Protein -20℃保存

IL-5與IL-5受體結(jié)合抑制劑(YM-90709)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg  YM-90709500mL Sodium Phosphate Buffer（鈉緩沖液）,0.2M,pH9.5  Sodium Phosphate Buffer,0.2M,pH9.5  常溫保存

非咪唑組胺H4受體激動(dòng)劑(VUF10460)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  VUF104601 管 X33酵母菌 Y187 Yeast Strain -80℃保存

S1P1激動(dòng)劑（S1P1 Agonist III）  1mL(10mM)|10mg|50mg  S1P1 Agonist III2 ug pBAD33 pBAD33 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

COX抑制劑（Flunixin meglumine）  1mL(10mM)|1g|5g  Flunixin meglumine50次 柱式病毒RNAout  

HPGDS抑制劑（HPGDS inhibitor 1）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  HPGDS inhibitor 12 ug pCMV-CMV pCMV-CMV 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

COX-2抑制劑(FK 3311)  1mL(10mM)|10mg|50mg  FK 3311改良Skirrow氏瓊脂基礎(chǔ) Skirrow Agar Base ,Modified 250g

MAPKAPK2(MK2)激酶抑制劑  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg  MK2-IN-1 hydrochloride250g 聚乙二醇 6000 PEG6000 室溫陰涼干燥保存

PDE4抑制劑((S)-(+)-Rolipram)  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  (S)-(+)-Rolipram50T 人白血病融合基因PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存