操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

中文名稱：標(biāo)準(zhǔn)革蘭氏染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：4×10ml|4×100ml|4×250ml|4×500ml

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X6899

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

Pseudomonas aeruginosa綠膿假單胞探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周PROK2/Prokineticin 2  前動(dòng)力蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml

Herba scutellariae barbatae半枝蓮探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Rabbit Anti-human IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1mlTrk B/NTRK2  酪激B抗體 規(guī)格: 0.1ml

Arachnia propionica丙酸蛛網(wǎng)LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周phospho-ATG7(Ser95)  磷酸化自噬相關(guān)蛋白7抗體 規(guī)格: 0.1mlINPPL1  肌醇聚磷酸鹽磷酸樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Parascaris equorum馬蛔蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-human IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 0.1mlEndomucin  內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體 規(guī)格: 0.2ml

Herba portulacae馬齒莧LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周SCP3  聯(lián)會(huì)復(fù)合體蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Mink IgG/APC  APC標(biāo)記的兔抗水貂IgG 規(guī)格: 0.1ml

Human Parainfluenza Virus 2(HPIV-2)人副流感病毒2型RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Proteasome 19S 10B  蛋白體PRS10B抗體 規(guī)格: 0.2mlPHD1/prolyl hydroxylase  脯氨酰羥化抗體 規(guī)格: 0.2ml

Arthrinium spp.節(jié)菱孢霉屬通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr228)  磷酸化核糖體S6蛋白激β2抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Wee1(Ser642)  磷酸化WEE1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Clobodera rostochiensis馬薯金線蟲(chóng)PCR試劑盒PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Plzf  早幼粒細(xì)胞白鋅指蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Bovine IgM/HRP  辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1ml

NADC30-like Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(NADC30-like PRRSV)豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型NADC33株RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周phospho-PP2A alpha(Tyr307)  磷酸化蛋酸2A（PP2Aα）抗體 規(guī)格: 0.1mlHistone H2A.Z/ H2AFZ  組蛋白H2AZ抗體 規(guī)格: 0.2ml

Leishmania infantum嬰兒利什曼蟲(chóng)LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Phospho-FoxO1 (Ser319)  磷酸化叉蛋白家族1抗體 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-Bovine IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

標(biāo)準(zhǔn)革蘭氏染色液人賴氨酰氧化免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

葡萄糖胰蛋白胨瓊脂 英文名稱：Glucose Tryptone Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

瑞氏染色液 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*8

人丙轉(zhuǎn)氨/谷丙轉(zhuǎn)氨(ALT/GPT)免疫試劑盒*直銷

槲皮素 ： 117-39-5 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢

人ADP-核糖基化因子5(ARF5)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

小鼠游離甲狀腺素(FT4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

牛肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)免疫試劑盒*直銷

小鼠降鈣素原(PCT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

猴子內(nèi)皮素1(ET-1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝