中文名稱：Mcl-1抑制劑（Marinopyrrole A）

英文名稱：Marinopyrrole A

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7919

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人 KDM4B 基因全長ORF克隆小鼠三碘甲狀腺原(T3)免疫試劑盒進口、組裝

人 PSG1 基因全長ORF克隆小鼠乳腺癌標志物-CA153免疫試劑盒進口、分裝

人 ATL2 基因全長ORF克隆小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 PEX13 基因全長ORF克隆小鼠溶菌(LZM)免疫試劑盒*直銷

人 RPTOR 基因全長ORF克隆小鼠絨毛膜促性腺激素β(β-CG)免疫試劑盒進口、組裝

人 MKL2 基因全長ORF克隆小鼠絨毛膜促性腺激素(CG)免疫試劑盒進口、分裝

人 B3GNT3 基因全長ORF克隆小鼠妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 KLF3 基因全長ORF克隆小鼠熱休克因子1(HSF1)免疫試劑盒*直銷

人 PGLYRP3 基因全長ORF克隆小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)免疫試劑盒進口、組裝

人 PELI3 基因全長ORF克隆小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)免疫試劑盒進口、分裝

人 TSPAN17 基因全長ORF克隆小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

Mcl-1抑制劑（Marinopyrrole A）泛WNK-kinase抑制劑(WNK463)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  WNK463100g 肌醇 Inositol 室溫干燥保存

NADPH氧化酶抑制劑(Apocynin)  1mL(10mM)|1g|5g  Apocynin50T 流感病毒甲型H1N1 PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

泛PIM抑制劑  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  PIM-447 dihydrochloride5mL 心肌細胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

LDHA抑制劑(GNE-140 racemate)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  GNE-140 racemate50mL Ammonium Chloride（氯化銨溶液）, 0.5M  Ammonium Chloride, 0.5M  常溫保存

VCP/p97抑制劑(NMS-873)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  NMS-87310 mg DiI （細胞膜紅色熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

HDAC6抑制劑(ACY-1215)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  ACY-12151瓶 PC-12(高分化)細胞株 PC-12(高分化) 低溫運輸和保存

PI3K抑制劑(GSK2126458)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg  GSK2126458肉浸液肉湯培養(yǎng)基 Meat Infusion Broth 250g

Met-related抑制劑(BMS 777607)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  BMS 77760710g 氯化銫 Cesium Chloride(CsCl) 室溫干燥保存

RARα激動劑(AM580)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  AM58050mL Zinc Sulfate Solution（硫酸鋅溶液）,100mM  Zinc Sulfate Solution,100mM  常溫保存

非甾體芳香酶抑制劑(Letrozole)  1mL(10mM)|25mg|50mg|100mg|200mg|500mg  Letrozole100g 十二烷基磺酸鈉 SDS 常溫保存

STAT3抑制劑  1mL(10mM)|10mg|50mg  Homoharringtonine2 ug pBBR1-MCS2 pBBR1-MCS2 低溫運輸，-20℃保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)