中文名稱：迪夫快速染色液

英文名稱：Diff-Quik Stain Solution

產(chǎn)品規(guī)格：2×100ml|2×500ml|3×100ml|3×250ml|3×500ml

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X6713

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

Bacillus coagulans凝結(jié)芽孢桿LAMP試劑盒 種源性檢測(cè) 50次 低溫 負(fù)20度 一年 3-4周phospho-NDEL1(Ser242)  磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體 規(guī)格: 0.1mlC3a Receptor/C3aR  過敏毒素C3受體/補(bǔ)體C3受體抗體 0.2ml

轉(zhuǎn)基因功能基因Bt染料法熒光定量PCR試劑盒 定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Rabbit Anti-human sIgA/HRP  辣根過氧化物標(biāo)記兔抗人IgA 規(guī)格: 0.1mlTIF1 Alpha/TRIM24  轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α抗體 規(guī)格: 0.2ml

Hepatitis B Virus X Protein乙型肝炎病毒X蛋白LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周TRAF4/CART 1  瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格: 0.1mlCEP55  中心體蛋白55kDa抗體 規(guī)格: 0.2ml

Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1O)人免疫缺陷病毒1型O群RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周ANKRD26  錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體 規(guī)格: 0.2mlPLC β2/Phospholipase C beta 2  磷酯Cβ2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Swine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus（SADS-CoV）豬急性腹瀉綜合征探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 3-4周phospho-c-Abl(Tyr283)  磷酸化非受體酪激c-Abl抗體 0.1mlRabbit Anti-rat IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

SARS-CoV-2（）Orf1ab基因染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周phospho-CBL2(Tyr731)  磷酸化原蛋白CBL2抗體 規(guī)格: 0.1mlKIF3A  驅(qū)動(dòng)蛋白家族蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rhizoma smilacis glabrae土茯苓LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周COX4/COX IV-1  氧化IV亞型1抗體 規(guī)格: 0.2mlRNF25  環(huán)指蛋白25抗體 規(guī)格: 0.2ml

Corynebacterium spp.棒桿通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周γ-taxilin/LSR5  脂多糖相關(guān)反應(yīng)蛋白5抗體 0.2mlIFRD1  干擾素相關(guān)發(fā)育調(diào)節(jié)蛋白1抗體（神經(jīng)生因子誘導(dǎo)蛋白PC4） 規(guī)格: 0.2ml

Acidovorax avenae ssp. citrulli瓜類細(xì)性果斑病探針法熒光定量PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 -20℃ 一年 2-4周Goat Anti-rat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlphospho-FADD(Ser194)  磷酸化Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Pseudogyrincheilus procheilus油魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測(cè) 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周SPON2/M spondin/Mindin  細(xì)胞外基質(zhì)底物反應(yīng)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlPARL  骨骼肌細(xì)胞線粒體膜蛋白PARL抗體 規(guī)格: 0.2ml

迪夫快速染色液豬高爾基蛋白73(GP-73)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

犬Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)免疫試劑盒*直銷

小鼠核苷酸化(PNP)免疫試劑盒*直銷

雞熱休克蛋白20(HSP-20)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

小鼠胺氧化(含黃素)A(MAOA)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

大鼠雄烯二酮(ASD)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

兔子Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)免疫試劑盒*直銷

大鼠基質(zhì)金屬蛋白13(MMP-13)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠B細(xì)胞κ輕肽基因增強(qiáng)子抑制因子,激β (IKBKB)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2(NRG2)免疫試劑盒*直銷

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)