操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：Hsc70/Hsp70新型小分子抑制劑(VER-155008)

英文名稱：VER-155008

產品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

產品貨號：BJ-01X7478

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

Porcine Torque Teno Virus（PTTV）豬細環(huán)病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周IL-10  白細胞介素-10抗體 規(guī)格: 0.1mlVimentin  波形蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Ostertagia ostertagi奧斯特奧斯特線蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周VP2  重組豬細小毒VP2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPCNA [Proliferation Marker]  增細胞核抗原抗體 規(guī)格: 0.1ml

Haemophilus ducreyi杜克雷嗜血桿探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周beta-Amyloid(1-28)  β淀粉樣肽（1-28）抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-IKK alpha/IKK beta (Ser180/Ser181)  磷酸化KB抑制蛋白激α/β抗體 規(guī)格: 0.1ml

Endoconcha sepiae海螵蛸染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周SAMD9  SAMD9蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Avidin/PE-CY5  PE-CY5標記的兔抗親和素 規(guī)格: 0.1ml

Red Sea Bream Iridovirus(RSIV)真鯛虹彩病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-PLCG2(Tyr1217)  磷酸化磷酯Cγ2抗體 規(guī)格: 0.1mlANGEL2  ANGEL2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Equine Herpesvirus 1 (EHV-1)馬皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周KLK10  激肽釋放10抗體 規(guī)格: 0.1mlPKA/PKAcat/PKACB  蛋白激A抗體 規(guī)格: 0.1ml

Caulis spatholobi雞血藤染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周ATP6IP2  ATPH+轉運溶體輔助蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlARRDC2  抑制蛋白結構域蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Nocardia farcinica皮諾卡LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Maltose Binding Protein/MBP  麥芽糖結合蛋白抗體 0.2mlKLK5  激肽釋放5抗體 規(guī)格: 0.1ml

Transmissible Gastroenteritis Virus(TGEV)豬傳染性胃腸炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CCL5/RANTES  T細胞特異性趨化因子抗體 規(guī)格: 0.1mlNF1/Neurofibromin 1  1型神經纖維瘤抗體 規(guī)格: 0.1ml

Dermanyssus gallinae雞皮刺螨染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-chicken IgM/Cy5  Cy5標記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1mlACADS  ?；oA脫短鏈抗體 0.2ml

Hsc70/Hsp70新型小分子抑制劑(VER-155008)GHS抑制劑(Alexamorelin)

CETP抑制劑（Torcetrapib）

甲狀腺過氧化物酶和5-脫碘酶抑制劑（Propylthiouracil）

H+/K+,ATPase抑制劑(TAK-438 free base)

3β-羥化類固醇脫氫酶抑制劑（Trilostane）

HegG2抑制劑(Megestrol Acetate)

GHSR激動劑（Ibutamoren Mesylate）

ET-1合成抑制劑(Estradiol cypionate)

孕酮受體激動劑（Medroxyprogesterone ）

GnRH激動劑（Goserelin acetate）

非甾體孕酮受體激動劑（Tanaproget）