儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 產(chǎn)品名稱 | 豬圓環(huán)病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Porcine Circovirus(PCV) | 貨號 | BJ-R7091 |
產(chǎn)品特點: 1. 豬圓環(huán)病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增; 2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘; 3. 抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。 在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。 特異性熒光標記: TaqMan法 TaqMan探針的特性: (1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等 (2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q) (3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光 (4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針 相對定量通過內(nèi)標定量: 內(nèi)標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。 檢測步驟: 一、 試劑的準備 從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。 設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表: 試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量 熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL 酶混合物 1 µL N×1 µL 總量 15 µL N×15µL (1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。 7.2 qPCR反應(yīng)條件 將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。 推薦循環(huán)條件: 1循環(huán) 50℃ for 2 min 預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec 在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 PCR實驗步驟 典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是: 將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈; 人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短; 耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。 以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品: NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纖維5×106cells/瓶×2 苜蓿中華瘤菌 COLO 320(人結(jié)腸細胞)香菇 Lentinula edodes 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基 規(guī)格: 1000ml/瓶 用途: 用于金黃色葡萄球菌的分離和初步鑒別 費氏中華瘤菌 Sinorhizobium fredii異旋孢腔菌 Cochliobolus heterostrophus 沙氏BHI瓊脂/沙氏腦心浸瓊脂/Sabouraud BHI Agar真菌檢測250克國產(chǎn)/進口 低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)重組蛋白英文名稱:Recombinant Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha (HIF1a) Hs 746T(人胃細胞)5×106cells/瓶×2 SCDLP體培養(yǎng)基 規(guī)格: 250g 用途: 用于疏水性化妝品樣品處理及化妝品和一次性使用衛(wèi)生用品增菌培養(yǎng)(化妝品衛(wèi)生規(guī)范微生物檢驗方法2... 人十二指腸腺細胞苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti 小鼠卵巢上皮細胞*培養(yǎng)基100mL 豬圓環(huán)病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒人結(jié)腸長春新堿耐藥株英文名稱:HCT-8/V 球孢白僵菌 Beauveria bassiana大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum 腦浸粉(牛)/牛腦浸粉/牛腦提取物/Brain infusion powderBR250克國產(chǎn)/進口 LB瓊脂 規(guī)格: 250g 用途: 用于一般細菌培養(yǎng),特別用于分子生物學(xué)試驗中大腸桿菌的保存和培養(yǎng)。 刺孢吸水鏈霉菌北京變種 Streptomyces hygrospinosus var. beigingenisNCI-H838(人非小細胞肺細胞) 非洲綠猴腎細胞英文名稱:VERO 四環(huán)素檢定瓊脂/Tetracyline Examination Agar副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口 藍色預(yù)染中分子量蛋白Marker費氏中華瘤菌 Sinorhizobium fredii 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum 腫瘤蛋白p53(TP53)重組蛋白英文名稱:Recombinant Tumor Protein p53 (TP53) 紅細胞補體受體1(CR1)重組蛋白英文名稱:Recombinant Complement Receptor 1, Erythrocyte (CR1) |