實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側的兩條單鏈互補結合，兩個引物在模板上結合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品特點：
1. 白堊立克次氏體探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學修飾的熱啟動聚合酶，反應特異性高，*程度地避免了非特異擴增；
2. 反應緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應靈敏快速，40個循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強，反應重復性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
 特異性熒光標記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量：
內(nèi)標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細胞中的表達量或在基因組中定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

高錳酸鉀分子式：158.03英文名稱：Potassium permanganate：7722-64-7分子量： KMnO4

醋潑尼松英文名稱：Prednisone acetate分子式：400.46分子量： C23H28O6：125-10-0

氯乙酰吡分子式：187.63英文名稱：Pyridine chloride：1126-58-5分子量： C7H10ClN3O

5-氯-2,3-吡分子式：145.54英文名稱：5- -2,3- pyridine：53233-89-9分子量： C5H4ClNO2

異丙鍶分子式：205.79英文名稱：Strontium strontium：88863-33-6分子量： C6H14O2Sr

氯兩面針堿英文名稱：Chlorination of two needles分子式：383.82分子量：C21H18ClNO4：13063-04-2

白花前胡甲素英文名稱：White flowers before Hu Jiasu分子式：398.41分子量：C22H22O7：73069-25-7

十二烷溴吡分子式：328.33英文名稱：Twelve alkyl bromide：104-73-4分子量： C17H30BrN

3-鄰-甲氧分子式：英文名稱：3- ortho toluene oxypiperidine：63843-39-0分子量： C12H17NO

地塞米松英文名稱：Dexamethasone分子式：392.46分子量： C22H29FO5：18296

對三氟腈分子式：171.12英文名稱：To three f：455-18-5分子量： C8H4F3

白堊立克次氏體探針法熒光定量PCR試劑盒801-D (人巨細胞性肺細胞)5×106cells/瓶×2

毒蕈堿型膽堿受體M1(CHRM1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Cholinergic Receptor, Muscarinic 1 (CHRM1)

小單孢菌 Micromonospora sp.大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

G1(發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞)5×106cells/瓶×2

小鼠樹突狀細胞肉瘤細胞英文名稱：DCS

Caki-2(人腎透細胞細胞)鏈霉菌 Streptomyces sp.

kasumi-1, 人白血病細胞株

鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus平菇 Pleurotus ostreatus

L選擇素(SELL)重組蛋白英文名稱：Recombinant Selectin, Leukocyte (SELL)

卵黃多粘菌素B溶/Egg-Yolk Polymyxin B Solution甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎配套試劑50毫升國產(chǎn)/進口

UM-UC-3(人膀胱移行細胞)5×106cells/瓶×2