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產(chǎn)品展示
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微細毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
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產(chǎn)品型號:
50T
產(chǎn)品報價:
產(chǎn)品特點:
微細毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴增,從而大限度地減少非特異性擴增產(chǎn)物的產(chǎn)生,提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性。
  50T微細毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒的詳細資料:

產(chǎn)品特點:
1. 微細毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
 特異性熒光標記:
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性:
(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內(nèi)標定量:
內(nèi)標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量。

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品名稱

微細毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱

Trichostrongylus tenuis

貨號

BJ-R7309

檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實驗步驟
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品:

2,3-二甲酸分子式:英文名稱:2,3- two piperidine formic acid:8249-15-3分子量:

2-三氟甲氧氯分子式:196.55英文名稱:2- three, f:450-96-4分子量: C7H4ClF3O

1--3-硝分子式:249.01英文名稱:1- -3-:645-00-1分子量: C6H4INO2

1-(對)萘分子式:233.31英文名稱:1- (p-tolyl-amino) naphthalene:634-43-5分子量: C17H15N

2-甲-5-甲氧并噻唑分子式:179.24英文名稱:2甲- 5 -甲氧并噻唑:2941-69-7分子量: C9H9NOS

黃芪甲苷英文名稱:Astragalus saponins分子式:784.97022分子量:C41H68O14:83207-58-3,84687-43-4

4-溴-1,2-(亞甲二氧)分子式:201.02英文名稱:4- -1, 2- (Ya Jiaji two) benzene:2635-13-4分子量: C7H5BrO2

1,4-二乙分子式:134.22英文名稱:1,4- two ethyl benzene:105-05-5分子量: C10H14

4-(Boc-)-1-[(2-羥)(噻吩-2-)甲]分子式:388.529英文名稱:4- (Boc- -) -1-[(2- hydroxyphenyl) (thiophene -2-) methyl] piperidine:870703-80-3分子量: C21H28N2O3S

糠醛英文名稱:Furfural分子式:96.08分子量: C5H4O2:35796

直接紅81英文名稱:Direct red 81分子式:675.6分子量: C29H19N5Na2O8S2:259636

微細毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒吳茱萸堿規(guī)格:20mg/支;98%

C-型凝集素域家族2成員C(CLEC2C)重組蛋白英文名稱:Recombinant C-Type Lectin Domain Family 2, Member C (CLEC2C)

苜蓿中華瘤菌豌豆瘤菌 Rhizobium leguminosarum

RAG(小鼠腎腺細胞)5×106cells/瓶×2

人呼吸道上皮細胞*培養(yǎng)基100mL

克氏雙糖鐵瓊脂/Kilgler Iron Agar細菌復(fù)合生化試驗250克國產(chǎn)/進口

人成骨細胞*培養(yǎng)基100mL

泡盛曲霉 Aspergillus awamori大鼠卵巢上皮細胞*培養(yǎng)基

家貓膚成纖維樣細胞英文名稱:CatS2

NCI-H524(人非小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2

人腦微血管內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL

 

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 微細毛圓線蟲 探針法 熒光定量PCR試劑盒
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