實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 停乳鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴(kuò)增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強(qiáng)，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
 特異性熒光標(biāo)記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

1,2-二分子式：128.13英文名稱：1,2- two cyanobenzene：91-15-6分子量： C8H4N2

錳粉/錳片分子式：54.94英文名稱：Manganese powder / manganese tablet：7439-96-5分子量： Mn

硬脂酸鋁分子式：877.4英文名稱：Aluminium stearate：637-12-7分子量： C54H105AlO6

2-氯-6-甲吡分子式：127.57英文名稱：2- -6- methyl pyridine：18368-63-3分子量： C6H6ClN

2-溴-5-甲噻唑分子式：178.05英文名稱：2- bromo -5- methylthiazole：41731-23-1分子量： C4H4BrNS

2-氯-6-乙氧吡分子式：157.6英文名稱：2- -6-, ethyl：42144-78-5分子量： C7H8ClNO

6-硝喹啉分子式：174.16英文名稱：6- nitro group：613-50-3分子量： C9H6N2O2

四硼(2-乙-4-甲)咪唑分子式：430.39英文名稱：Four benzene -4- (2- ethyl methyl)：53831-70-2分子量： C30H31BN2

2',3'-二-O-乙酰-5'-脫氧-5-氟-D-胞分子式：329.28英文名稱：2', 3'- two, -O-, -5'-,, -D-, -5-：161599-46-8分子量： C13H18FN3O6

4-溴吡唑分子式：146.97英文名稱：4- bromide：2075-45-8分子量： C3H3BrN2

2,4,5-三氯聯(lián)英文名稱：2,4,5- three - - - - - - - - - -分子式：257.54分子量： C12H7Cl3：16606-02-3

停乳鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒酪蛋白胨/酪胨/胰酪胨/胰酪蛋白胨/CasitoneBR250克國產(chǎn)/進(jìn)口

人前列腺細(xì)胞Hacat(人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞)

解脂亞羅酵母 Yarrowia lipolytica蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis

MR-VP培養(yǎng)基/MR-VP試驗(yàn)用培養(yǎng)基/緩沖葡萄糖肉湯/葡萄糖肉湯/MR VP Broth腸桿菌科細(xì)菌的甲基紅和VP試驗(yàn)250克國產(chǎn)/進(jìn)口

整合素α5(ITGα5)重組蛋白英文名稱：Recombinant Integrin Alpha 5 (ITGa5)

CCL-149(大鼠肺泡上細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

菌種培養(yǎng)基/Strain Medium（For B.Cerus）四環(huán)素檢測中蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口

BL瓊脂培養(yǎng)基/BL Medium雙岐桿菌分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口

鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus人羊膜上皮細(xì)胞

胰蛋白胨/胰蛋白胨/TryptoneBR250/500克國產(chǎn)/進(jìn)口

泡盛曲霉 Aspergillus awamori費(fèi)氏中華瘤菌 Sinorhizobium fredii