中文名稱：Trk抑制劑(GNF-5837)

英文名稱：GNF-5837

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8043

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人 EEF1E1 基因全長ORF克隆人胰高血糖素(GC)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 BTG1 基因全長ORF克隆人胰多肽(PP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 SDHC 基因全長ORF克隆人胰淀素(Amylin)免疫試劑盒*直銷

人 SDHD 基因全長ORF克隆人胰淀粉(PAMY)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 C10orf53 基因全長ORF克隆人胰島細(xì)胞抗原2抗體/蛋白酪抗體(IA-2A)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 OPALIN 基因全長ORF克隆人胰島細(xì)胞抗體(ICA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 MMGT1 基因全長ORF克隆人胰島素自身抗體(IAA)免疫試劑盒*直銷

人 ATPIF1 基因全長ORF克隆人胰島素原(PI)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 OCIAD2 基因全長ORF克隆人胰島素樣因子3(INSL3)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 LSM6 基因全長ORF克隆人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(IGFBP7/MAC25/PSF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 FNDC3B 基因全長ORF克隆人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5(IGFBP-5)免疫試劑盒*直銷

Trk抑制劑(GNF-5837)促血小板生成素受體激動劑(Eltrombopag)  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  Eltrombopag氧化試劑  1g

NPC1L1抑制劑(Ezetimibe)  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg  Ezetimibe5g 8- 羥基硫酸鹽 8-Hydroxyquinoline Sulfate   室溫避光保存

中性鞘磷脂酶抑制劑(GW4869)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  GW486950T 蠟樣芽孢桿菌PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

ROCK抑制劑(GSK269962A)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  GSK269962A5g 3-(3,4- 二羥基苯 )-L-  3-(3,4-Dithydroxyphenyl)-L-Alanine  室溫干燥保存

低氧誘導(dǎo)因子脯氨酰羥化酶抑制劑（Daprodustat）  2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Daprodustat100mL ADA Buffer，0.5M,pH7.4   ADA Buffer，0.5M,pH7.4   常溫保存

P2Y12受體抑制劑（Clopidogrel hydrogen sulfate）  1mL(10mM)|100mg|500mg  Clopidogrel hydrogen sulfate10mL DNA上樣液 (紅色),6× DNAON  4℃保存

myosin激活劑（Omecamtiv mecarbil）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Omecamtiv mecarbil2 ug pGBKT7-Lam pGBKT7-Lam 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

CYP2C19和CYP2B6抑制劑（Fenofibrate）  1mL(10mM)|200mg|5g|10g  Fenofibrate液體乳糖培養(yǎng)基 Fluid Lactose Medium 250g

LXR激動劑（GW3965 hydrochloride）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  GW3965 hydrochloride1瓶 COS-7 SV40細(xì)胞株 COS-7 SV40 低溫運(yùn)輸和保存

Na+，K+-ATPase抑制劑（Istaroxime hydrochloride）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Istaroxime hydrochloridePALCAM瓊脂平板（9cm） PALCAM Agar 10個/包

HMG-CoA reductase抑制劑（Atorvastatin hemicalcium salt）  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg  Atorvastatin hemicalcium salt500U 熱敏 Antarctic Phosphatase -20℃保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)