細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 中文名稱:p110α抑制劑(A66) 英文名稱:A66 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg 產(chǎn)品貨號(hào):BJ-01X8015 A66是一種高特異性的選擇性的p110α抑制劑,IC50為32nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :1166227-08-2 純度:99.26% 分子量:393.53 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。 操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí). 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90) 人 PNKD 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊胰島素(INS)免疫試劑盒*直銷 人 EXT1 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 CARF / ALS2CR8 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 PRPF3 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 POMGNT1 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)免疫試劑盒*直銷 人 BIN3 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊血管緊張素轉(zhuǎn)化(ACE)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 KCNIP4 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 RRAGD 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊血管緊張素Ⅰ(ANG-Ⅰ)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 ATP6V1D 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊褪黑素(MT)免疫試劑盒*直銷 人 GSTO1 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊銅藍(lán)蛋白(CP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 PSMB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆山羊瘦素(LEP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 p110α抑制劑(A66)mTOR抑制劑(WAY-600) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg WAY-600硫酸鹽還原菌專屬培養(yǎng)基(postgate培養(yǎng)基) 250g BRAF抑制劑(BRAF inhibitor) 1mL(10mM)|10mg|50mg BRAF inhibitor1瓶 RSC96細(xì)胞株 RSC96 低溫運(yùn)輸和保存 MDM2/p53抑制劑(Nutlin 3b) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg Nutlin 3b草酸鉀兔血漿 Potassium Oxalate In Rabbit Plasma 0.2ml*20 VEGFR2和Met抑制劑(BMS-794833) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg BMS-79483325g DEAE葡聚糖凝膠 A-50 DEAE-Sephadex A-50 室溫保存 TGN抑制劑(STF-62247) 1mL(10mM)|10mg|25mg|50mg STF-6224750T 傳染性法氏囊病病毒PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 CDK抑制劑(NU2058) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg NU2058100mL BCIP/NBT顯色試劑盒 BCIP/NBT Chromogenic Kit 4℃避光保存 Aurora A抑制劑(MK-8745) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg MK-87452 ug pYES2NT/A pYES2NT/A 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 細(xì)胞分裂抑制劑(DM4) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg DM430次 土壤DNAout Soil DNAOUT 常溫 HDAC抑制劑(BML-210) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg BML-2102 ug pET-21(+) pET-21(+) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 JNK抑制劑(BI-78D3) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg BI-78D3SIM動(dòng)力培養(yǎng)基 SIM power medium 250g PDK1抑制劑(BX517) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg BX5171瓶 35.1細(xì)胞株 35.1 低溫運(yùn)輸和保存
|