操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：AO染色液(1mg/ml)

英文名稱：

產品規(guī)格：10ml

產品貨號：BJ-01X6689

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1瓶 CTLL-2株 CTLL-2 低溫運輸和保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Thioredoxin-dependent peroxide reductase, mitochondrial

25g 多聚甲醛 Paraformaldehyde 密封干燥保存 0.312-20 nmol/mL ELISA Kit for Human Cysteine dioxygenase type 1

1g 氯化血紅素 Hemin(Hemin Chloride) 4℃干燥避光保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Urea transporter 1

Amies運送培養(yǎng)基管 Amies Transport Medium 20支/包 0.625-40 ng/mL 人/蘇蛋白激PLK2(PLK2)ELISA試劑盒

1瓶 JEG-3/VP16-IL-2株 JEG-3/VP16-IL-2 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL 人淋巴抗原6復合位點蛋白G6F ELISA試劑盒

20 mg L-Canavanine（iNOS抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human NEDD8-activating enzyme E1 catalytic subunit

鹽增菌液（SC） Selenite Cystine Broth 10ml*20支/包酪胨瓊脂    進口、國產Peptone from Casein Agar用于生物制品無菌試驗250

2 ug pCMV5-300 pCMV5-300 低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 ng/mL 人雌激素受體β(ERβ)ELISA試劑盒

250mL Phosphate Buffer，0.5M, pH8.5  Phosphate Buffer，0.5M, pH8.5  常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Myelin basic protein

2 ug pGEM Ex1 pGEM Ex1 低溫運輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Phorbol-12-myristate-13-acetate-induced protein 1

BL瓊脂培養(yǎng)基 BL Agar Medium 250g 0.156-10 ng/mL 人Mimecan基因(Mimecan)ELISA試劑盒

AO染色液(1mg/ml)大鼠蛙皮素,雨蛙肽免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

兔過氧化物體增殖物激活受體γ(PPARG)免疫試劑盒進口、分裝

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m-遠藤氏培養(yǎng)基 英文名稱：M-Endo Medium 產品規(guī)格：250g

人抗內因子抗體(IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

牛奶培養(yǎng)基 英文名稱： 產品規(guī)格：250g

人干擾素a-抗體(Anti-IFN-ab)免疫試劑盒*直銷

放線菌培養(yǎng)基(改良高氏1號) 英文名稱：Actinomycetes culture medium 產品規(guī)格：250g