本公司代理ATCC細胞,提供售前售后一條龍服務,若要獲取詳細的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。 產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 大鼠肺動脈成纖維細胞規(guī)格 | Rat pulmonary fibroblasts | 5×105cells |
產品特點: 1、 使用方便:不需昂貴設備。 2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時的注意事項: 1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。 4. 冷凍保存的細胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。 4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數細胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。 培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 人DNA結合蛋白(DBP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human DBP (DNA Binding Protein) ELISA Kit 人D-二聚體(D2D)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human D2D (D-Dimer) ELISA Kit 人D-乳酸脫氫酶(D-LDH)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human D-LDH (D-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 人增殖相關蛋白2G4 (PA2G4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human PA2G4 (Proliferation Associated Protein 2G4) ELISA Kit 人凝血因子Ⅷ(F8)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human F8 (Coagulation Factor Ⅷ) ELISA Kit 人Ⅰ型膠原α1(COL1α1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human COL1α1 (Collagen Type I Alpha 1) ELISA Kit 人VI型膠原α3(COL6α3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human COL6α3 (Collagen Type VI Alpha 3) ELISA Kit 人XIII型膠原 (COL13)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human COL13 (Collagen Type XIII) ELISA Kit 人XIV型膠原 (COL14)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human COL14 (Collagen Type XIV) ELISA Kit 人III型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTX-III)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CTX-III (Cross Linked C-telopeptide of Type III Collagen) ELISA Kit 人EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成酶抗體(EJ/GlyRS)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human EJ/GlyRS (Anti-EJ-Antibody) ELISA Kit 人肝配蛋白A1 (EFNA1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human EFNA1 (Ephrin A1) ELISA Kit 人E選擇素(SELE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human SELE (E-Selectin) ELISA Kit 人F-框蛋白2(FBXO2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human F-Box Protein 2(FBXO2) ELISA Kit 大鼠肺動脈成纖維細胞規(guī)格指示選擇性培養(yǎng)基基礎 250(g) GBS 瓊脂基礎 (Islam) (CM0755) Oxoid 賴氨酸鐵瓊脂 (CM0381) Oxoid PBS,(1X) pH7.220012-027 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTM) 無菌實驗的厭氧菌和需氧菌培養(yǎng)100mL*25 MR-VP broth Methylred-VOGES-PROSKAUER broth MR-VP肉湯/甲基紅 VOGES-PROSKAUER肉湯 1.05712.0500MERCK默克 Thioglycolate medium G 疏基乙酸鹽培養(yǎng)基G 1.16761.0500MERCK默克 磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基 250(g) Fraser肉湯基礎 250(g) HE瓊脂(HE) 1000(g) 煙酸測定用培養(yǎng)基 100(g) |