培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。 本公司代理ATCC細胞,提供售前售后一條龍服務(wù),若要獲取詳細的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | BEL-7402(人肝癌細胞)規(guī)格 | BEL-7402 (human hepatoma cell) | 5×106cells |
產(chǎn)品特點: 1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。 2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時的注意事項: 1. 在冷凍保存之前,應(yīng)觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。 4. 冷凍保存的細胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。 4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應(yīng)作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設(shè)定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。 實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 二基酰胺 訂購|咨詢 規(guī)格: 1ml 化Bcl-2抗體 Ank-B ELISA Kit 錨蛋白B(Ank-B)ELISA試劑盒 抑霉唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%) 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2% Imazalil solution NZM肉湯/NZM BrothBR100克國產(chǎn)/進口 巖黃連 英文名稱:Yan Huanglian 保存:-20℃ 規(guī)格:1g 類固受體激活蛋白2抗體 松果菊苷 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg L-瓜氨抗體 EMB ELISA Kit Embigin蛋白(EMB)ELISA試劑盒 去氧尿苷 訂購|咨詢 規(guī)格: 100mg 酰膽堿酯酶抗體 CCL26 ELISA Kit 趨化因子26(CCL26)ELISA試劑盒 2-溴-4'-基酰(>98.0%(GC)(T)) 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T) 2-Bromo-4'-phenylacetophenone 小鼠成肌細胞泡盛曲霉 Aspergillus awamori 去吳茱萸堿 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg 成熟相關(guān)蛋白BOULE抗體 CC16 ELISA Kit 克拉拉細胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒 十七碳酯 英文名稱:Seventeen methyl carbonate 保存:-20℃ 規(guī)格:20mg p21蛋白抗體 柴胡皂苷C;Saikosaponin C 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 Improved-Lowry蛋白定量試劑盒500次國產(chǎn) 吐溫60 質(zhì)量規(guī)格:BR Tween-60 液體沙氏培養(yǎng)基/沙堡氏4%葡萄糖瓊脂肉湯/薩布羅氏葡萄糖瓊脂肉湯/SDB霉菌和酵母菌的增菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口 哈巴俄苷 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 人Ⅱ型前膠原羧基端肽(PⅡCP)ELISA試劑盒人96T3.12-200 ng/mL大鼠成纖維細胞生長因子10(FGF-10)ELISA試劑盒,英文名:FGF-10 ELISA Kit 莽草 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR Shikimic acid RT4(人膀胱移行細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2 頭孢克肟 英文名稱:Cefixime 保存:-20℃ 規(guī)格:100mg 胃粘液素抗體 BEL-7402(人肝癌細胞)規(guī)格ECT2 上皮細胞轉(zhuǎn)化蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml SMARCA1/SNF2L 解旋酶SNF2L抗體 規(guī)格: 0.2ml Rabbit Anti-Bovine IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1ml Rabbit Anti-rat IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml V.cholera Ogawa 01群小川型霍亂弧菌抗體 規(guī)格: 0.2ml ANKRD20A3 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體 規(guī)格: 0.2ml GM-CSF 粒細胞-巨噬細胞克隆刺激因子抗體 規(guī)格: 0.1ml XPC DNA補充修復(fù)XPC細胞蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml Tuberin/TSC2 馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 規(guī)格: 0.2ml USP9X 泛素特異性蛋白酶9X抗體 規(guī)格: 0.2ml AUP1/Ancient ubiquitous protein 1 原始廣泛存在蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml Insulin Receptor/CD220 胰島素受體抗體 規(guī)格: 0.1ml Elastin 彈性蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1ml |