凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細(xì)胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1 ml) 計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細(xì)胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲(chǔ)存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設(shè)定程序之等速降溫機(jī)中,再放入液氮槽中。程序?yàn)? program 7: HB CELL 。 本公司代理ATCC細(xì)胞,提供售前售后一條龍服務(wù),若要獲取詳細(xì)的說明書或價(jià)格信息,請咨詢在線客服。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | ECV-304(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)規(guī)格 | ECV-304 (human umbilical vein endothelial cells) | 5×106cells |
產(chǎn)品特點(diǎn): 1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。 2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時(shí),背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細(xì)胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時(shí)的注意事項(xiàng): 1. 在冷凍保存之前,應(yīng)觀察細(xì)胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細(xì)胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長期儲(chǔ)存后對細(xì)胞會(huì)有毒性。 4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細(xì)胞濃度不要太高,某些雜交瘤會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24 小時(shí)后。 4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6,依細(xì)胞種類而異。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護(hù)劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細(xì)胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時(shí),亦應(yīng)作一個(gè)backup culture,以防止冷凍失敗。 培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí); 4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 實(shí)驗(yàn)報(bào)告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 鈣黃綠素酰酯 質(zhì)量規(guī)格:>95%,美國進(jìn)口原裝 Calcein-AM 人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基米曲霉 Aspergillus oryzae 芒柄花苷;Onin 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg ELISA Kit for Human Ras GTPase-activating-like protein IQGAP1小鼠層粘連蛋白α1(LAMα1)ELISA試劑盒,英文名:LAMα1 ELISA Kit 東莨菪堿; 溴東莨菪堿; 溴東 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白樣2B抗體 KLF15 ELISA Kit Kruppel樣因子15(KLF15)ELISA試劑盒 似梨木雙黃;Ochnaflavone7 訂購|咨詢 規(guī)格: 人丙激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒人96T1.56-100 U/mL大鼠N-酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨(AcSDKP)ELISA試劑盒,英文名:AcSDKP ELISA Kit 木蘭花堿;唐松草堿 英文名稱:Magnoflorine; Tang Song potash 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 環(huán)指蛋白16抗體 4-三胺(來米特雜質(zhì)I) 訂購|咨詢 規(guī)格: 50mg ELISA Kit for Human Collagen alpha-1(XV) chain小鼠5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒,英文名:5-HT ELISA Kit 對傘花烴、異丙基對;4-異丙基 英文名稱:P-cymene, isopropyl toluene; 4- isopropyl toluene 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 微管相關(guān)蛋白抗體 奇任 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg/vial 人轉(zhuǎn)膠蛋白3(T0ransgelin-3)ELISA試劑盒人96T0.78-50 ng/mL大鼠顆粒酶B(GZMB)ELISA試劑盒,英文名:GZMB ELISA Kit 地骨皮素 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 人肌質(zhì)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP酶3(SERCA3)ELISA試劑盒人96T0.312-20 ng/mL.小鼠一氧化氮(NO)ELISA試劑盒,英文名:NO ELISA Kit 5’-DMT-2’-TBDMS-rU 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 5’-DMT-2’-TBDMS-rU 棲土曲霉 Aspergillus terricola金霉素鏈霉菌 Streptomyces aureofaciens 冬綠苷 英文名稱:Gaultherin 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 監(jiān)理蛋白抗體 光萼野百合堿(光萼豬屎豆堿;烏拉明) 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支; 人膠原蛋白α-1(XVIII)鏈(Collagen alpha-1(XVIII) chain)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL小鼠成纖維細(xì)胞生長因子13(FGF-13)ELISA試劑盒,英文名:FGF-13 ELISA Kit 青蒿琥酯 英文名稱:Artesunate 保存:-20℃ 規(guī)格:100mg 視網(wǎng)膜S抗原抗體抗體 ECV-304(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)規(guī)格遠(yuǎn)志山III CAS 162857-78-5 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 基苯酞 CAS 551-08-6 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 銀杏內(nèi)酯J CAS 107438-79-9 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 水仙苷 CAS 604-80-8 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 矢素-3-O-葡萄糖苷 CAS 7084-24-4 規(guī)格: HPLC≥98%;5mg 訂購|咨詢 羥基紅花黃色素A CAS 78281-02-4 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 香蒲新苷 CAS 104472-68-6 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 藥根堿 CAS 960383-96-4 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人參皂苷Rg2 CAS 52286-74-5 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 異鼠李素 CAS 480-19-3 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 辛弗林 CAS CAS:94-07-5 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 苦杏仁苷 CAS 29883-15-6 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 大黃酚 CAS 481-74-3 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 檸檬烯 CAS 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 |