培養(yǎng)：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺(tái)內(nèi)，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個(gè)橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。
4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時(shí)不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計(jì)數(shù)。
7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) =計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

3,6-二基菲(>95.0%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC) 3,6-Dimethylphenanthrene 大鼠成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基三葉草根瘤菌 Rhizobium trifolii

β-淀粉樣蛋白(1-42),人 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR β-Amyloid Peptide (1-42), human 香菇 Lentinula edodes苜蓿中華根瘤菌

山梔苷酯 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體 RXFP1 ELISA Kit 松弛素/胰島素樣肽受體1(RXFP1)ELISA試劑盒

 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 ELISA Kit for Human Puromycin-sensitive aminopeptidase大鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒，英文名：PCNA ELISA Kit

七葉皂苷 IIa;Escin IIa 訂購|咨詢 規(guī)格： 10mg 橋粒糖蛋白4抗體 RCN2 ELISA Kit 網(wǎng)鈣蛋白2(RCN2)ELISA試劑盒

阿托伐他汀 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 Atorvastatin T-24(人膀胱細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

對(duì)二 訂購|咨詢 規(guī)格： 100mg 中心體蛋白128抗體 FMN2 ELISA Kit 形成素2(FMN2)ELISA試劑盒

鹽巴馬汀,鹽掌葉防己堿(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Palmatine hydrochloride 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae無花果曲霉 Aspergillus ficuum

(R型)人參皂苷Rh2 訂購|咨詢 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 鈣結(jié)合蛋白樣39抗體 RELM-β ELISA Kit 抵抗素樣分子β(RELM-β)ELISA試劑盒

氯喹（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定 Chloroquine diphosphate 爪哇根霉 Rhizopus javanicus大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基

帕米二鈉鹽 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口 Pamidronate, Disodium Salt PYG液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)/PYG Broth Base雙岐桿菌增菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口

東莨菪內(nèi)酯；莨菪亭，莨菪亭，東莨菪素  英文名稱：Scopoletin; scopoletin scopoletin scopoletin,,   保存：-20℃   規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支 緊密連接蛋白2抗體

阿魏 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人高密度脂蛋白膽固(HDL-C)ELISA試劑盒人96T12.5-800 ng/mL小鼠對(duì)氧酶1(PON1)ELISA試劑盒，英文名：PON1 ELISA Kit

LS 180(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)價(jià)格IRAK4  白介素-1受體相關(guān)激酶4抗體 規(guī)格: 0.2mlAT1R/AGTR1  管緊張素Ⅱ-1型受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

MMP-9  基質(zhì)金屬蛋白酶9抗體 規(guī)格: 0.1mlMCM3  微小染色體維持缺陷蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Btk(Ser180)  磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-Gria2 (Ser880)  磷酸化谷氨酸受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-chicken IgG/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.3mlKIF1B  驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員1B抗體 規(guī)格: 0.2ml

Astrocyte  人星形膠質(zhì)細(xì)胞抗體 規(guī)格: 0.2mlSLC16A3/MCT4  單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3/4抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD98  CD98重鏈抗原抗體 規(guī)格: 0.1mlGNLY/NKG5  顆粒溶素抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-EGFR (Tyr1101)  磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mouse Anti-Goat IgG/FITC  FITC標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.3ml

Exportin 5  核輸出蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml

BECN1L1  Bcl-2同源結(jié)構(gòu)域樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

FXYD1  磷酸神經(jīng)膜抗體 規(guī)格: 0.1ml

VGLL1  轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

RBC(G2H4)  小鼠抗人紅細(xì)胞單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

CDKAL1  周期素依賴性激酶5調(diào)節(jié)蛋白1樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。