產(chǎn)品特點: 1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。 2、 可以處理各種細(xì)菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 本公司代理ATCC細(xì)胞,提供售前售后一條龍服務(wù),若要獲取詳細(xì)的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | A-375(人惡性黑色素瘤細(xì)胞)規(guī)格 | A-375 (human malignant melanoma cells) | 5×106cells |
? 細(xì)胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時的注意事項: 1. 在冷凍保存之前,應(yīng)觀察細(xì)胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細(xì)胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細(xì)胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細(xì)胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性。 4. 冷凍保存的細(xì)胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細(xì)胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細(xì)胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細(xì)胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。 4-3.貼壁腫瘤細(xì)胞: 1 x 10^6,依細(xì)胞種類而異。腺癌類的細(xì)胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細(xì)胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細(xì)胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細(xì)胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應(yīng)作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細(xì)胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1 ml) 計數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細(xì)胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設(shè)定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。 培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 兔V-Myc骨髓細(xì)胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔信號傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子5A(STAT5A)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔白介素3介導(dǎo)核因子(NFIL3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔神經(jīng)絲蛋白3(NEF3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔τ-蛋白激酶1(τPK1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔髓樣前體細(xì)胞抑制因子2(MPIF2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔纖維蛋白原α(FGα)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔激肽原1(KNG1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔結(jié)締組織生長因子(CTGF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔半乳凝集素7(GAL7)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔表皮生長因子受體(EGFR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A(CAPA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 兔REST協(xié)阻抑因子3(RCOR3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 A-375(人惡性黑色素瘤細(xì)胞)規(guī)格REG1β/REG1 beta 胰島細(xì)胞再生因子β抗體 規(guī)格: 0.2mlASAM/ACAM 脂肪細(xì)胞特異性粘附分子抗體 規(guī)格: 0.1ml CTRP1/G protein coupled receptor interacting protein 1 G蛋白偶聯(lián)受體相互作用蛋白1抗體(補體Clq TNF相關(guān)蛋白1) 規(guī)格: 0.2mlId1 DNA結(jié)合抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml SLC27A1 鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlDR6/CD358 瘤細(xì)胞調(diào)亡素/瘤壞死因子受體死亡受體6抗體 規(guī)格: 0.2ml PDZD6 PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK6蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.1ml NCF/NCF4/p40phox 嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子4抗體 規(guī)格: 0.1mlCK I alpha/STK 絲/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶抗體Casein kinase Ⅰα(CKⅠα) 規(guī)格: 0.1ml SIRT6 沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-ERK5(Ser496) 磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶5抗體 規(guī)格: 0.1ml TSPAN2 四分子交聯(lián)體2抗體(四旋蛋白) 規(guī)格: 0.2mlMyelin PLP 髓磷酯髓鞘蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml JMJD2A/KDM4A/JHDM3A 組蛋白去甲基化酶JMJ2A抗體 規(guī)格: 0.2mlAlpha-Synuclein/Syn/SNCA 核突觸蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1ml LPL protein 內(nèi)皮脂肪酶 規(guī)格: 0.1mlSESN1/PA26 p53調(diào)控PA26核蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml Interferon alpha 6 干擾素α6抗體 規(guī)格: 0.2mlPol II/RNA polymerase II RNA聚合酶II抗體 規(guī)格: 0.2ml C11orf53 11號染色體開放閱讀框53抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-PTPRA(Ser180) 磷酸化酪氨酸磷酸酶α抗體 規(guī)格: 0.1ml Phospho-YAP1(Tyr407) 磷酸化原基因Yes相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-TNK1 (Tyr277) 磷酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶Tnk1抗體 規(guī)格: 0.1ml C12ORF61 12號染色體開放閱讀框61抗體 規(guī)格: 0.2mlM2-PK/PKM2 小鼠抗丙酮酸激酶-M2抗體 規(guī)格: 0.1ml ZNF268 鋅指脂蛋白-1c抗體 規(guī)格: 0.1mlBRCC3/BRCC36 易感基因復(fù)合物亞基蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml |