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分子生物學(xué)方法
點(diǎn)擊次數(shù):378 更新時(shí)間:2016-04-12

    目前所有*的細(xì)胞因子的基因均已克隆化,故能較容易地得到某一細(xì)胞因子的cDNA探針或根據(jù)已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測(cè)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的方法多種多樣,常使用斑點(diǎn)雜交、Northern blot、逆轉(zhuǎn)錄PCR,細(xì)胞或組織原位雜交等。實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵在于制備高質(zhì)量的核酸探針和獲得合格的待測(cè)物(提取的mRNA樣品或細(xì)胞/組織標(biāo)本)。ELISA試劑盒

    核酸探針是指一段用放射性同位素或其他標(biāo)記物(如生物素等)標(biāo)記并與ELISA試劑盒目的基因互補(bǔ)的DNA單鏈DNA、RNA。根據(jù)其來(lái)源可分為cDNA探針、寡核核苷酸探針、基因組基因探針及DNA探針等。其中cDNA探針和人工合成寡核苷酸探針常用于斑點(diǎn)雜交及Northern blot,而RNA探針因穿透性好更適用于原位雜交。核酸探針技術(shù)的應(yīng)用已經(jīng)程序化,近年來(lái)出現(xiàn)的RT-PCR檢測(cè)特異性mRNA的方法也廣泛用于細(xì)胞因子研究領(lǐng)域。該法具有靈敏、快速等優(yōu)點(diǎn),甚至從1~10個(gè)細(xì)胞中就可檢出其中的特異mRNA。
    上述三種方法,各有優(yōu)缺點(diǎn),可互相彌補(bǔ),在實(shí)際應(yīng)用中,可根據(jù)各自的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)室條件進(jìn)行選擇。生物學(xué)檢測(cè)法比較敏感,又可直接測(cè)定生物學(xué)功能,是ELISA試劑盒zui可靠的方法,適用于各種實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,是科研部門zui常用的技術(shù),但需要長(zhǎng)期培養(yǎng)依賴性細(xì)胞株,檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng),步驟繁雜,影響因素多,不容易熟練掌握。免疫學(xué)檢測(cè)法比較簡(jiǎn)單,迅速,重復(fù)性好,但所測(cè)定的只代表相應(yīng)細(xì)胞因子的量而不代表活性,同時(shí)敏感度也低于生物活性檢測(cè)法(約低10~100倍)。分子生物學(xué)法只能檢測(cè)基因表達(dá)情況,不能直接提供有關(guān)因子的濃度及活性等資料,主要用于機(jī)制探討。在檢測(cè)細(xì)胞因子時(shí),必須考慮到細(xì)胞因子的作用具有網(wǎng)絡(luò)性的特點(diǎn),人們需明確檢測(cè)方法所測(cè)定的細(xì)胞因子成分,并考慮其抑制劑和可溶性受體的水平,將各種結(jié)合使用,有可能得到較為可靠的結(jié)果。

LRG1    富含亮氨酸α2糖蛋白抗體
LPPR4    腦特異性磷脂酸磷酸酶樣蛋白1抗體
LR8    跨膜蛋白TMEM176B抗體
LRRTM2    富含亮氨酸重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白2抗體
LRRTM4    富含亮氨酸重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白4抗體
LZIC    LZIC蛋白抗體
LGI3    Lgi3蛋白抗體
Lhx4    Lhx4蛋白抗體
Lunatic Fringe    信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SCDO3抗體
LEO1    RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體
LCMV    淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒蛋白抗體
LC3A/B    自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3A/3B抗體
Gonadoliberin-1    黃體激素釋放激素/促性腺激素釋放激素抗體
LRRC23    LRRC23蛋白抗體

ELISA試劑盒
 

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