SABC（Strept Actividin-Biotin Complex）法是一種顯示組織和細胞中抗原分布的簡便而敏感的免疫組化染色方法。由于該方法中的鏈霉親和素的等電點接近中性（pH=6.0-6.5），對組織和細胞的吸附性特別低，因而具有較低的背景。它的步驟與其他免疫組化染色基本相似，有良好的可操作性。

盡管SABC法操作簡便，敏感性強，但是，在操作中仍然要遵循一定的原則，才能得到可信度高的結(jié)果。elisa試劑盒

下面就按照實驗步驟，談一下我的一些體會。

1、載玻片防脫片劑處理：應(yīng)用多聚賴氨酸涂片時，應(yīng)使用塑料容器稀釋多聚賴氨酸，防止多聚賴氨酸過多吸附于容器上，在染色時出現(xiàn)脫片現(xiàn)象。

2、切片常規(guī)脫蠟至水：二甲苯雖然可以反復(fù)使用，但次數(shù)不宜多。乙醇的濃度是從高到低，與脫水時相反。

3、滅活內(nèi)源性酶：博士德推薦應(yīng)用3%的雙氧水，但實際操作中，使用30%雙氧水和純甲醇按1:9的溶劑比混合較為理想。

4、抗原修復(fù)：由于β1-integrin在細胞膜上表達，因此沒有必要進行熱修復(fù)抗原或者微波修復(fù)抗原，只用到了抗原修復(fù)液。

5、正常山羊血清封閉：封閉時應(yīng)該注意室溫與時間的相對關(guān)系。室溫低，時間就要長一些，反之亦然。另外，保持反應(yīng)池濕潤是重要的一環(huán)，否則，前功盡棄。后面的步驟也是如此。elisa試劑盒

6、一抗（抗β1-integrin）反應(yīng)：一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度與背景有直接關(guān)系。一般說來，陽性染色強度不夠時，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間；背景過高時則相反。

一抗的濃度：這需要自行探索，雖然試劑公司給出了參考濃度，但仍然要探索出恰當?shù)臐舛?，任何取巧的念頭都是在自討苦吃。

孵育時間與溫度：抗原抗體充分反應(yīng)是得到可靠結(jié)果的關(guān)鍵。因此，控制溫度與時間也是一個嚴肅的問題。由于室溫控制較為困難，建議4℃冰箱過夜（≥18h）。

7、二抗（生物素化山羊抗兔IgG）反應(yīng)：觀察發(fā)現(xiàn)，37℃條件下二抗反應(yīng)20分鐘，盡管反應(yīng)池保持濕潤，但在排除了其他因素后，仍然得不到陽性結(jié)果。原因在于，二抗沒有與其他溶液混勻而聚集在反應(yīng)池四周，在37℃孵育20分鐘甚至更長的時間后，二抗干燥，根本沒有充分反應(yīng)。解決的方法是：二抗的量要相對多些，同時要混勻；隨時觀察反應(yīng)池的情況。

另外一種原因，就是儀器顯示溫度37℃，但實際只有23℃，自然結(jié)果難以令人滿意。因此，查找原因時，不應(yīng)被表面現(xiàn)象迷惑，應(yīng)該認真地落實每一步，才能找到解決辦法。

8、SABC染色（37℃）：這是博士德的人性化之處，直接就可以用。

9、DAB顯色鏡下控時：DAB濃度應(yīng)該比推薦的要低一些，這樣可以便于控制反應(yīng)時間以及在合適的時候中止反應(yīng)。

同時注意，使用后殘余的DAB應(yīng)妥善處理，而不是隨便倒入下水道，因為它可能有致癌性。

10、蘇木素輕度復(fù)染：不建議使用。盡管復(fù)染后標本層次分明，但實際情況是，這樣有時也會掩蓋陽性結(jié)果，從而使前功盡棄。elisa試劑盒
11、脫水透明：脫水乙醇的濃度由低到高，有一個較準確判斷脫水成功與否的辦法是：觀察透明后盛二甲苯容器的壁，若發(fā)現(xiàn)白色霧狀現(xiàn)象，則說明脫水不成功，應(yīng)再次脫水。透明時間不要太長，1分鐘左右就可以了。

12、封片：封片時，中性樹脂量宜少，同時注意不要產(chǎn)生氣泡。