研究蛋白質(zhì),首先要得到高度純化并具有生物活性的目的物質(zhì)。蛋白質(zhì)的制備工作涉及物理、化學(xué)和生物等各方面知識(shí),但基本原理不外乎兩方面。一是得用混合物中幾個(gè)組分分配率的差別,把它們分配到可用機(jī)械方法分離的兩個(gè)或幾個(gè)物相中,如鹽析,有機(jī)溶劑提取,層析和結(jié)晶等;二是將混合物置于單一物相中,通過物理力場(chǎng)的作用使各組分分配于來同區(qū)域而達(dá)到分離目的,如電泳,超速離心,超濾等。
在所有這些方法的應(yīng)用中必須注意保存生物大分子的完整性,防止酸、鹼、高溫,劇烈機(jī)械作用而導(dǎo)致所提物質(zhì)生物活性的喪失。蛋白質(zhì)的制備一般分為以下四個(gè)階段:選擇材料和預(yù)處理,細(xì)胞的破碎及細(xì)胞器的分離,提取和純化,濃細(xì)、干燥和保存。
(1)得用微生物菌體分泌到培養(yǎng)基中的代謝產(chǎn)物和胞外酶等;(2)如蛋白質(zhì)、核酸和胞內(nèi)酶等。植物材料必須經(jīng)過去殼,脫脂并注意植物品種和生長(zhǎng)發(fā)育狀況不同,其中所含生物大分子的量變化很大,另外與季節(jié)性關(guān)系密切。對(duì)動(dòng)物組織,必須選擇有效成份含量豐富的臟器組織為原材料,先進(jìn)行絞碎、脫脂等處理。另外,對(duì)預(yù)處理好的材料,若不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn),應(yīng)冷凍保存,對(duì)于易分解的生物大分子應(yīng)選用新鮮材料制備。微生物、植物和動(dòng)物都可做為制備蛋白質(zhì)的原材料,所選用的材料主要依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩泶_定。對(duì)于微生物,應(yīng)注意它的生長(zhǎng)期,在微生物的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,酶和核酸的含量較高,可以獲得高產(chǎn)量,以微生物為材料時(shí)有兩種情況: