在這項研究中,研究人員采用了一種具有疏蛋白(protein-repellent)性的柔性聚合物,并以一種可結(jié)合蛋白材料作為聚合物的盒狀支撐點,通過激光直刻法(Direct Laser Writing Method)制作出一種特殊的聚合物支架。這種支架的疏蛋白結(jié)構(gòu)由25微米高的支柱組成,各個支柱之間通過細棒連接,連接點高度不一,然后盒狀支撐點被地放在細棒中間。當(dāng)含有粘附蛋白的溶液浸入支架時,蛋白只會與盒狀支撐點相結(jié)合,兩小時內(nèi),個體細胞占滿支架,且只粘附在特定位點。由此,通過改變支撐點和細棒的位置,可實現(xiàn)對細胞形狀的三維控制
6、DAB:
6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit:
使用前只需將試劑盒提供的A、B、C三種試劑各一滴加至1ml雙蒸水中,即可獲得1ml DAB工作液,簡單易用。
6.1 ZLI-9030 DAB:
6mgDAB溶于10mlTBS(0.05M pH7.6),再加入0.1ml濃度為3%的H2O2,過濾掉沉淀物,即可。
7、AEC:
4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中,加入14ml濃度為0.1M的醋酸緩沖液(pH5.2),然后加入0.15ml 3%H2O2,過濾掉沉淀物。
8、RIPA:
1×PBS,1%NP 40,0.5 sodium deoxycholate,0.1% SDS(此液體可長期保存)。以下抑制劑以儲存液方式保存,臨用前加入RIPA中。
8.1 10mg/ml PMSF異丙醇溶液(用量為10 l/ml)
8.2 Aprotinin(Sigma產(chǎn)品,用量為30 l/ml)
8.3 1000mM sodium orthovanadate冷凍液
(用量為10 l/ml)
9、Blotto A:
常規(guī)使用1×PBS,5% milk,0.05% Tween 20。
10、Blotto B:
與Phosphotyrosine抗體共用,1×PBS,1% milk,0.05% Tween 20。部分實驗中milk可*去除,但可能引起背景增高。