酶聯(lián)免疫測定技術(shù)（ELISA）的放大系統(tǒng)

    EIA本身是以酶[辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）等]作標記物的，因此，EIA的測定放大始終是圍繞著標記酶來作文章的，不外乎三種可能的方式：①增加標記酶的量；②非顯色底物的應(yīng)用；③附加一個受標記酶催化的反應(yīng)系統(tǒng)。

    一、增加標記酶的量

    通過生物素／親合素—酶或酶／抗酶復(fù)合物的間接方法，可以增加ELISA測定中zui后所測定的標記酶的量。這種方法雖在一定程度上由于標記酶的聚集增加了EIA的測定敏感性，但同時有增加非特異的背景顯色的可能。

    二、非顯色底物的應(yīng)用

    從酶的反應(yīng)底物著手，使用具有高測定敏感性的非顯色底物如熒光素或發(fā)光物，從而提高EIA的測定敏感性，這種方法的優(yōu)點是不需額外的步驟及試劑制備，缺點是需要特殊的測定儀器。

    三、附加一個受標記酶催化的反應(yīng)系統(tǒng)

原始標記酶催化附加一個反應(yīng)系統(tǒng)，如酶底物反應(yīng)循環(huán)或酶級聯(lián)反應(yīng)，從而達到反應(yīng)放大的目的。這種由數(shù)個催化反應(yīng)的耦聯(lián)而構(gòu)建的放大系統(tǒng)，是酶放大的根本之所在，敏感性的提高來源于真正的信號放大，而不是簡單地將一個分子轉(zhuǎn)變?yōu)楦嗟囊子跍y定的分子。一個適用的酶放大系統(tǒng)的選擇除了要考慮生化因素外，zui為重要的是酶及其底物的穩(wěn)定性，并要易于獲得，因其對試驗的準確性和重復(fù)性有較大的影響。