科研實(shí)驗(yàn)室選擇抗體確定事項(xiàng):
實(shí)驗(yàn)室科研工作離不開抗體,WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體,那科研實(shí)驗(yàn)室如何選擇合適的一抗選擇要點(diǎn)如下:
1、確定抗體的名字。注意中英文名字、它名、亞型等信息。
2、確定你的實(shí)驗(yàn)類型。Elisa,WB,IHC,ICC,還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過適用于何種實(shí)驗(yàn)的類型,如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型,而僅是說明尚未經(jīng)過此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,請根據(jù)說明書列出的已驗(yàn)證的類型來選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。
3、確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬。Human,Mouse,還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種物種實(shí)驗(yàn),請根據(jù)說明書列出已驗(yàn)證的種屬來選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。
4、樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇合適的抗體,待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過程中是否會變性,蛋白空間構(gòu)象的改變,會影響抗體的免 疫親和反應(yīng)。
5、單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等避免)。