抗原是指能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生(特異性)免疫應(yīng)答,并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細(xì)胞在體內(nèi)外結(jié)合,發(fā)生免疫效應(yīng)(特異性反應(yīng))的物質(zhì)。介紹檢測(cè)抗原的三種方法:
1、雙抗體夾心法:
屬于非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,檢測(cè)抗原常用的方法,檢測(cè)含有至少兩個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原。原理是先將特異性抗體與固相載體連接;加入待測(cè)標(biāo)本,形成固相抗原抗體復(fù)合物;再加入酶標(biāo)抗體形成雙抗體夾心,洗滌;加底物顯色,根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量檢測(cè)。
如血清標(biāo)本中有類風(fēng)濕因子(RF) 存在,則可出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng),因?yàn)镽F是一種抗變性IgG的自身抗體,它能與多種動(dòng)物的變性IgG的Fc部分結(jié)合,因此RF就可作為固相抗體和酶標(biāo)抗體之間的橋接抗原。
雙抗體夾心法只適用于二價(jià)或以上的較大分子抗原的測(cè)定,不能用于小分子半抗原的檢測(cè)。
2、雙位點(diǎn)一步法:
針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同且空間距離較遠(yuǎn)的決定簇,包被使用一種單抗,酶標(biāo)記使用另一種單抗。測(cè)定時(shí)將待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入,溫育、洗滌,加入底物顯色。若待測(cè)抗原濃度過(guò)高時(shí),過(guò)量的抗原可分別同固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合而抑制夾心復(fù)合物的形成,出現(xiàn)鉤狀效應(yīng) ,顯色降低,甚至假陰性。必要時(shí)可將標(biāo)本經(jīng)過(guò)適當(dāng)稀釋后重復(fù)測(cè)定。
3、競(jìng)爭(zhēng)法:
用于測(cè)定小分子抗原,如藥物、激素 等。原理為先用抗小分子的特異性抗體包被固相,然后同時(shí)加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)記的小分子 ,兩種小分子競(jìng)爭(zhēng)與固相上的抗小分子的特異性抗體結(jié)合,溫育一定時(shí)間后洗滌,加入酶底物顯色。