免疫組化實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生組織切片非特異性染色分析
點(diǎn)擊次數(shù):403 更新時(shí)間:2024-02-05
免疫組化實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生組織切片非特異性染色分析:
1、抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過(guò)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來(lái)控制。這是最重要的一條;
2、一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看;
3、內(nèi)源性過(guò)氧化物酶和生物su在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細(xì)胞多的組織),需要通過(guò)延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來(lái)降低背景染色;
4、非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過(guò)延長(zhǎng)二抗來(lái)源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來(lái)加強(qiáng)封閉效果;
5、DAB孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或濃度過(guò)高;
6、PBS沖洗不充分,殘留抗體結(jié)果增強(qiáng)著色,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要;
7、標(biāo)本染色過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)干片,這容易增強(qiáng)非特異性著色。