當(dāng)引物二聚體形成時(shí)，如果使用與 DNA 雙鏈結(jié)合的染料，在 NTC 反應(yīng)中也可觀察到熒光信號。無論是基于探針還是雙鏈 DNA 結(jié)合染料的反應(yīng)，在存在污染物的情況下，也可看到晚期擴(kuò)增。A是擴(kuò)增曲線B是溶解曲線。

如果在每一個(gè) NTC 反應(yīng)里都出現(xiàn)擴(kuò)增，很可能是其中一種或兩種試劑被污染了。可采用以下步驟防止或去除污染。

1、使用干凈的工作臺，用帶核酸降解試劑的的溶液擦抹工作臺面。

2、 用帶 dUTP 和 UDG 的反應(yīng)預(yù)混液降解來自前序 PCR反應(yīng)的產(chǎn)物，防止前序 PCR 反應(yīng)的污染。

3、 用新的反應(yīng)管通過置換不同來源的試劑，發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)問題的試劑。

4、 在條件允許的情況下，在不同的實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)建立反應(yīng)，尤其是當(dāng)應(yīng)用質(zhì)粒作為對照時(shí) (質(zhì)粒可以被很容易擴(kuò)散并且難以去掉)。