ELISA檢測(cè)未知抗原夾心法操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):466 更新時(shí)間:2023-09-08
用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法(eg:ELISA雙抗體夾心法測(cè)定培養(yǎng)上清中IFN-γ水平)操作步驟:
1、包被:取空白 96 孔板,按 COA 用 PBS 稀釋捕獲抗體,每孔 100μl捕獲抗體工作液,室溫過夜;
2、洗板:每孔 350μl洗液,洗板 3 次;
3、封閉:加入封閉液 200 μL/孔封閉 ELISA 板,室溫孵育 1h;
4、洗板:甩去板中的封閉液體,加入洗液 350μL/孔,洗板 3 次;
6、加樣:取出包被封閉好的 96 孔板,分別加入 100μl標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋好的樣品,標(biāo)準(zhǔn)品做復(fù)孔,室溫孵育 2h;
7、洗板:每孔 350μl洗液,洗板 3 次;
8、加酶標(biāo)抗體:按 COA 用稀釋液稀釋檢測(cè)抗體,每孔 100μl檢測(cè)抗體工作液,室溫孵育 2h;
9、洗板:每孔 350μl洗液,洗板 3 次;
10、加入底物:每孔 100μl顯色液,室溫避光孵育 20min,連續(xù)觀察顏色變化;
11、加終止液:每孔 50μl終止液,輕柔混勻;
12、讀板:檢測(cè)根據(jù)酶標(biāo)儀器操作方法,上機(jī)檢測(cè) OD值,通過計(jì)算獲得所測(cè)物質(zhì)的濃度。