人Elisa試劑盒原理：

人Elisa試劑盒是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（capture Ab）固定在固相載體上，再加入一級(jí)檢測(cè)抗體（primarydetection Ab），形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶（enzyme）標(biāo)記了，即可用來直接測(cè)定抗原的量，若無，則可利用另一個(gè)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來測(cè)定抗原的量。測(cè)定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)（substrate），作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系，依此原理計(jì)算出樣本中的抗原總量或濃度。

人Elisa試劑盒加樣：

人Elisa試劑盒的靈敏度較高，則應(yīng)該按規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。 加樣品時(shí)，單孔用量要求：≥20ul/指標(biāo)，如需要做2個(gè)復(fù)孔則血量≥60ul/指標(biāo)。如果用量充足，提供50ul/孔/指標(biāo)。具體用量也需根據(jù)試劑盒的要求而定。 吸取樣品時(shí)，加樣槍頭不應(yīng)粘附多余的液體；加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體，否則會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上，加樣不準(zhǔn)確。正確加樣方法應(yīng)為45度，吸頭貼著孔壁和液面的交界處加入。加樣時(shí)速度不可過快，否則無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性；要避免樣品加在孔壁上部而產(chǎn)生非特異性吸附。不可將樣品濺出以避免對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。 

人Elisa試劑盒操作步驟：

1、將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。

2、加受檢標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。

3、加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。

4、加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。在臨床檢驗(yàn)中，此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗人Elisa試劑盒，包被和酶標(biāo)用的抗體分別取自不同種屬的動(dòng)物。如應(yīng)用單克隆抗體，一般選擇兩個(gè)針對(duì)抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng)，作一步檢測(cè)。