試管法測定蛋白質濃度

1.配制工作液:根據標準品和樣品數量，按 50 體積試劑 A，1 體積試劑 B 配制適量 BCA 工作液，充分混勻。工作液配制的量要與測定所用的比色杯對應。每個測定要做 2~3 個平行。本處列舉的比色體系所用的是 0.5 mL 的比色杯。如比色杯規(guī)格不同，體系需要放大到實驗將采用的比色杯準確讀數所需要的體積。

2.BSA 標準品和樣品的準備:樣品用水或其它不干擾顯色反應的緩沖液配制，使待測定的濃度位于標準曲線的線性部分。每個反應準備 3 個平行測定。標準曲線一般 5~6 個點即可。根據樣品的估測濃度確定各點的具體濃度。稀釋 BSA 時可以用水或與樣品一致的溶液。如待測樣品的濃度約為 200 μg/mL，可按下表的次序加入 BSA 標準品、樣品及 BCA 工作液。

3.取適量體積的標準蛋白，以蛋白液:工作液=1:20 的比例混勻。37 ℃ 溫浴 30 min。冷卻至室溫。

4.將樣品與標準品在 562 nm 波長下測定吸光度。